抗胰岛素样生长因子1受体单链抗体复性研究

• 作者: 孙雪文 宋永红 张红艳 张跃栋 苏县辉 许岩丽
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 胰岛素样生长因子1受体 单链抗体 包涵体 高通量 柱上复性
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 开发与应用
• 页码范围: 478-483,466
• 页数: 7页
• 分类号: Q819
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2018.05.0083

摘要

[目的]建立抗人胰岛素样生长因子1受体单链抗体包涵体复性方法.[方法]首先,在96孔板上进行稀释复性,从72种复性液中筛选最佳条件.每孔复性液2 mL,滴入起始浓度1.5 mg/mL的包涵体溶解液100 μL过夜复性.然后,选择最佳复性液与变性液混合在Superdex 75柱上形成1 cm柱长下降5％的变性液梯度,样品按5％柱体积上样进行柱上复性.[结果]最适稀释复性液为C8(50 mmol/L Tris-C1,GSH-/GSSG=5/0.5 mmol/L,0.4 mol/L精氨酸,pH9.0),对应复性率约为78％;以该复性液为基础通过柱上复性,目标蛋白复性率提高到95％,复性样品抗原结合活性良好.[结论]建立了目标蛋白包涵体柱上复性方法,复性率达到95％,产量达到384 mg/L.