山羊TLR4基因在小鼠巨噬细胞中的表达及其对TLR2基因表达的影响

• 作者: 封竣淇 徐伟 罗卫星 罗铮 翁吉梅 蔡惠芬
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 黔北麻羊 TLR4基因 TLR2基因 真核表达载体
• 年，卷（期）: 2018,（11）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 1900-1908
• 页数: 9页
• 分类号: S827
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2018.11.009

摘要

Toll样受体家族(Toll like receptors,TLRs)是近年来广为研究的一类重要模式识别受体(pattern recognition receptor,PRRs),通过识别病原微生物的入侵而激活信号通路过程中的级联反应,诱导组织或机体产生细胞因子和炎症因子,在宿主对抗病原感染过程中起着极其重要的作用.本研究旨在探讨山羊(Capra hircus)TLR4基因在小鼠巨噬细胞中的过表达对小鼠(Mus musculus) TLR2基因表达的影响进行相关性探究.本实验运用反转录PCR (reverse transcription PCR,RT-PCR)扩增方法结合T克隆对黔北麻羊TLR4基因CDS全长进行克隆,通过与pEGFP-N1载体进行连接、转化及双酶切鉴定后构建pEGFP-N1-TLR4真核表达载体,利用lipofectamine3000TM瞬时转染于小鼠巨噬细胞(Ana-1)中,转染成功后提取细胞内总RNA,利用qRT-PCR对转染细胞Ana-1中TLR4与TLR2基因mRNA进行检测,并运用SPSS 18.0软件进行差异表达分析.结果显示:本实验成功克隆得到TLR4基因CDS区2 537 bp,并发现TLR4基因CDS区存在3个突变位点(T426C,C1254T,G1515A),3处突变均未引起氨基酸的改变,属同义突变;构建了pEGFP-N1-TLR4真核表达载体,成功转染小鼠巨噬细胞并成功表达,qRT-PCR检测结果显示TLR4与TLR2基因表达量为阳性＞阴性＞正常对照组,在空白组中TLR4与TLR2 mRNA表达量不存在差异显著性(P＞0.05),而阳性组中TLR4基因mRNA表达量显著高于TLR2 mRNA表达量(0.01 ＜P＜0.05),阳性组中TLR2 mRNA表达量亦显著高于空白组中TLR2 (0.01 ＜P＜0.05).结果说明TLR4的过表达对TLR2基因有促进作用.这为进一步研究TLR4与TLR2基因之间的互作及二者在胞内表达机制奠定基础.