梨小食心虫谷胱甘肽S-转移酶GmolGST6的基因克隆、原核表达和酶学特征

• 作者: 仵均祥 李伯辽 李帅 李广伟 李怡萍 苏丽
• 来源期刊: 昆虫学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 梨小食心虫 谷胱甘肽S-转移酶 嗅觉 表达分析 酶活力
• 年，卷（期）: 2018,（4）
• 所属期刊栏目: 生理与生化
• 页码范围: 398-409
• 页数: 12页
• 分类号: Q966
• 语种: 中文
• DOI: 10.16380/j.kcxb.2018.04.002

摘要

[目的]克隆一种梨小食心虫Grapholita molesta触角中谷胱甘肽S-转移酶(glutathione Stransferase,GST)基因并分析其结构特征,明确其表达特点及该基因编码蛋白的酶学特征,以期为该基因的功能研究提供理论依据.[方法]根据梨小食心虫雌虫触角转录组数据,利用RT-PCR克隆梨小食心虫GST基因;通过实时荧光定量PCR测定该基因在成虫触角、头(去触角)、胸、腹、足和翅中的转录水平;利用原核表达系统和Ni离子亲和层析技术表达和纯化梨小食心虫GST重组蛋白,并对重组蛋白的稳定性和酶促动力学参数进行分析.[结果]获得了梨小食心虫谷胱甘肽S-转移酶基因GmolGST6(GenBank登录号:MF503496)的完整编码序列,开放阅读框为645 bp,编码214个氨基酸,分子量为24.21 kD,理论等电点为5.10;进化树分析和三维结构模拟表明GmolGST6属于Delta亚家族.qPCR测定结果表明,GmolGST6基因在雌雄成虫触角中高丰度表达,且在雄虫触角中的表达量显著高于雌虫.重组蛋白GmolGST6具有催化通用底物CDNB的活性,并且在pH7.5,40℃时具有最高的酶活力.重组蛋白GmolGST6的米氏常数Km为0.21±0.06 mmoL/L,最大反应速度V max为14.02±1.40 μmoL/min · mg.[结论]根据GmolGST6的表达特点及其重组酶对模式底物CDNB的催化活性,推测在触角中高丰度表达的GmolGST6具有参与降解外源物质、保护嗅觉系统免受外源性物质毒害的功能.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李广伟	延安大学生命科学学院	3	8	1.0	2.0
2	苏丽	广西大学农学院	17	168	7.0	12.0