小肠结肠炎耶尔森菌β-N-乙酰葡萄糖胺酶调控机制及AmpD蛋白对AmpCβ-内酰胺酶表达的作用

• 作者: 张婧 景怀琦 梁俊容 段然 王鑫 秦帅 肖萌
• 来源期刊: 中华预防医学杂志
• 关键词: 耶尔森菌,小肠结肠炎 青霉素结合蛋白质类 N-乙酰胞壁酸-L-丙氨酸酰胺酶 氨苄青霉素头孢菌素酶 β-N-乙酰葡萄糖胺酶
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 653-660
• 页数: 8页
• 字数: 5622字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-9624.2018.06.016

摘要

目的 研究小肠结肠炎耶尔森菌β-N-乙酰葡萄糖胺酶(NagZ)的调控机制及AmpD蛋白对AmpCβ-内酰胺酶表达的作用.方法 通过对小肠结肠炎耶尔森菌3个AmpD蛋白同系物(AmpD1～3)基因(ampD1～3)、低分子量青霉素结合蛋白(LMM PBPs)基因(pbp4、pbp5a、pbp5b、pbp7)、NagZ基因(nagZ)以及ampR基因进行敲除或回补,以构建基因突变株,并利用头孢西丁对突变株进行诱导;采用检测头孢硝噻吩水解法测定诱导组和非诱导组突变株AmpCβ-内酰胺酶活性(单位为U),采用luxCDABEreporter系统检测AmpCβ-内酰胺酶启动子活性[单位为相对光单位(RLU)],采用对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷为显色底物测定NagZ酶活性(单位nmol/L).结果 AmpD1蛋白的功能较强,YEΔD1突变株的AmpCβ-内酰胺酶表达量出现上升,诱导组和非诱导组分别为(3.29±1.58)和(4.08±1.75)U.YEΔ5b、YEΔ4Δ5b、YEΔ5aΔ5b和YEΔ5bΔ7突变株AmpCβ-内酰胺酶启动子活性增强,其中YEΔ4Δ5b突变株活性最高,诱导组和非诱导组分别为(106903.16±61910.61)和(205427.45±45352.17)RLU.缺失3种基因的菌株中,YEΔ4Δ5bΔ7突变株AmpCβ-内酰胺酶启动子活性最高,诱导组和非诱导组分别为(304108.04±99274.53)和(531440.21±68891.02)RLU;缺失4种基因的菌株中,YEΔ4Δ5aΔ5bΔ7突变株AmpCβ-内酰胺酶启动子活性最高,诱导组和非诱导组分别为(1013810.99±260955.96)和(1230214.59±205526.79)RLU;敲除nagZ基因后,YEΔD1D2D3ΔZ突变株AmpCβ-内酰胺酶活性未发生明显的变化,而YEΔ4Δ5aΔ5bΔ7ΔZ突变株活性下降明显,诱导组和非诱导组分别为(0.30±0.20)和(0.29±0.21)U,基本降至野生株水平.结论 在肠杆菌科细菌中发现多个AmpD蛋白参与ampC基因的三级调控机制;发现以PBP5b为主,PBP4、PBP5a和PBP7共同参与的ampC基因调控模式;同时还证实了在小肠结肠炎耶尔森菌具有NagZ依赖和非依赖两种ampC基因调控途径.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	景怀琦	中国疾病预防控制中心传染病预防控制所	57	417	11.0	18.0
2	王鑫	中国疾病预防控制中心传染病预防控制所	60	304	11.0	15.0
3	梁俊容	中国疾病预防控制中心传染病预防控制所	16	72	5.0	8.0
4	段然	中国疾病预防控制中心传染病预防控制所	12	32	2.0	5.0
5	秦帅	中国疾病预防控制中心传染病预防控制所	3	12	1.0	3.0
6	张婧	中国疾病预防控制中心传染病预防控制所	5	13	2.0	3.0
7	肖萌	中国疾病预防控制中心传染病预防控制所	2	2	1.0	1.0