广西巴马小型猪SP1基因克隆测序及其真核表达载体的构建

• 作者: 兰干球 司景磊 夏攀杰 夏琴 崔悦悦 张广杰 李龙 邱庆庆 邹辉
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 广西巴马小型猪 SP1基因 克隆 真核表达载体 生物学信息分析
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产·蚕桑
• 页码范围: 360-366
• 页数: 7页
• 分类号: S828.89
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1191.2018.02.24

摘要

[目的]克隆广西巴马小型猪特异性蛋白1(SP1)基因,并构建其真核表达载体,为揭示其对猪生长发育的调控机理打下基础.[方法]利用RT-PCR从广西巴马小型猪背最长肌组织中扩增SP1基因,采用DNASTAR、TMHMM等分别进行基因生物信息学分析;以pEGFP-N1质粒构建真核表达载体pEGFP-N1-SP1并转染293T细胞,于转染48 h后在倒置荧光显微镜下观察并拍照.[结果]克隆获得的广西巴马小型猪SP1基因与GenBank中野猪(Sus scrofa)的参考序列(XM_005652569.3)一致,未发现碱基突变位点;其编码序列(CDS)全长2340 bp,编码779个氨基酸.广西巴马小型猪SP1蛋白不存在跨膜结构,也不存在信号肽,不属于分泌型蛋白;其二级结构中α-螺旋占17.84%,延伸链占21.31%,β-转角占9.76%,无规则卷曲占51.09%.构建的真核表达载体pEGFP-N1-SP1能成功转染至293T细胞中并表达出绿色荧光蛋白.[结论]广西巴马小型猪SP1基因CDS序列编码蛋白主要参与细胞内活动,而非外分泌型蛋白,以SP1基因构建的真核表达载体pEGFP-N1-SP1能转染293T细胞并成功表达,可直接用于后期SP1基因功能探索及干扰表达等研究.