用于植物病原细菌标记的pBB-GFP载体构建及应用

• 作者: 卓涛 户勋 李艳娇 范晓静 赵志文 邹华松
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 绿色荧光蛋白 标记 青枯劳尔氏菌 番茄细菌性斑点病菌 柑橘溃疡病菌
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 136-141
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017-0807

摘要

扩增青枯劳尔氏菌RipAK基因启动子序列,与lacZ基因融合得到pHM1∶PRiPAKLacZ.携带pHM1∶PRiPAKLacZ的青枯劳尔氏菌在营养丰富和基本培养基中都有LacZ活性,表明RipAK启动子可以推动lacZ基因的表达.为构建用于标记植物病原细菌的绿色荧光表达载体,把RipAK启动子和gfp基因克隆到质粒pBBR1MCS-5,使得gfp基因在RipAK启动子的驱动下表达;构建的表达载体pBB-GFP在大肠杆菌中即可表达绿色荧光蛋白.pBB-GFP载体能有效标记青枯劳尔氏菌、番茄细菌性斑点病菌和柑橘溃疡病菌,在荧光显微镜下观察到3种植物病原细菌呈短杆状,青枯劳尔氏菌还可形成多个菌体串联的线状结构.荧光标记对3种病原菌在寄主植物上的致病力没有影响,将标记菌株分别滴加在寄主植物叶片的创伤处,可观察到大量的绿色荧光聚集.本研究构建的pBB-GFP载体能用于多种植物病原细菌的绿色荧光标记,标记后的病原细菌在液体培养及侵染寄主植物过程中都能观察到荧光.