基于免疫共沉淀-液质联用技术的新型孕烷X受体配体检测方法的建立

• 作者: 侯俊 姜棋予 孙慧伟 李晓娟 柴燕涛 王志杰 赵敏 赵爽
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 孕烷X受体 免疫共沉淀 蛋白-小分子复合物 液质联用
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 397-403
• 页数: 7页
• 分类号: Q25|Q78
• 字数: 4591字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2018.03.017

摘要

目的:建立基于免疫共沉淀-液质联用技术的新型孕烷X受体(PXR)配体检测方法.方法:在HEK293细胞中转染带有Flag标签的PXR表达载体,裂解细胞后用偶联Flag抗体的微珠(beads)结合并分离细胞中表达的Flag-PXR蛋白;以PXR的已知最为公认的配体/激动剂利福平为模型药物,配制1μmol/L利福平溶液,与结合有Flag-PXR蛋白的微珠孵育形成微珠-蛋白-利福平复合物;将微珠从体系中分离出来,用蛋白印迹实验检测复合物中的蛋白质,用液相色谱-质谱联用技术(液质联用技术)检测复合物中的利福平.在此基础上对利福平的作用进行验证,在肝细胞癌细胞HepG2中检测系列浓度梯度的利福平对PXR转录因子活性的影响.结果:用免疫共沉淀技术从HEK293细胞中分离鉴定得到Flag-PXR蛋白;用液质联用技术检测到蛋白与小分子复合物中的利福平;利福平能够剂量依赖地诱导PXR的转录因子活性.结论:建立了基于免疫共沉淀-液质联用技术的新型PXR配体检测方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	侯俊	解放军第三○二医院临床研究管理中心	42	127	6.0	9.0
2	赵爽		6	18	2.0	4.0
3	王志杰	解放军第三○二医院临床研究管理中心	13	22	3.0	3.0
4	李晓娟	解放军第三○二医院临床研究管理中心	26	130	6.0	9.0
5	姜棋予	解放军第三○二医院临床研究管理中心	5	12	2.0	3.0
6	孙慧伟	解放军第三○二医院临床研究管理中心	3	5	1.0	2.0
7	柴燕涛	解放军第三○二医院临床研究管理中心	6	17	2.0	4.0