花生几丁质酶基因的克隆及抗病性验证

• 作者: 乔利仙 周文杰 姜平平 张茹琴 徐磊 潘雷雷 王晶珊 郭宝太 郭悦 隋炯明
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 花生 几丁质酶基因 遗传转化 抗病性 黑斑病菌
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 页码范围: 42-48
• 页数: 7页
• 分类号: Q785
• 字数: 5656字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7668/hbnxb.2018.06.006

摘要

为了探讨花生几丁质酶在抵御真菌性病害中的作用,克隆了花生几丁质酶基因并通过遗传转化验证了该基因的功能.以花生品种花育23号基因组DNA和RNA为模板,通过PCR及RT-PCR扩增分别获得长度为1779 bp的花生几丁质酶基因DNA序列及795 bp的全长cDNA序列.DNA及cDNA序列比对结果表明,该基因包含3个外显子和2个内含子,内含子剪切符合"GT……AG"规则,其cDNA序列被命名为Ah-Chi,编码265个氨基酸,GenBank注册号为HQ439775.利用NCBI在线Blast进行序列比对,结果表明,该蛋白产物与水稻、玉米、紫花苜蓿、大豆、拟南芥的相关蛋白的同源性分别达到83％,83％,72％,58％,49％.用Ah-Chi替换掉植物表达载体pCAMBIA1301上的Gus基因,成功构建了植物过表达载体pCAMBIA1301-Ah-Chi.利用农杆菌介导法将pCAMBIA1301-Ah-Chi转化花生胚小叶外植体,获得再生小苗,经嫁接移栽获得再生植株.利用PCR扩增筛选获得转基因阳性植株,RT-PCR扩增结果表明,转基因植株中Ah-Chi基因表达量增加.用黑斑病菌接种转基因植株和非转基因对照植株离体叶片7 d后,发现非转基因植株叶片褐化及坏死程度较为严重,而转基因植株叶片褐化及坏死程度相对较轻,初步说明转基因植株抗病性增强.