摘要:
目的 研究官内缺氧和庆大霉素(GM)双重影响对仔鼠内耳听力损伤影响的关系.方法 建立宫内慢性缺氧(Intrauterine chronic hypoxia,CIH)孕鼠模型,24只SD孕大鼠分为正常组和缺氧组,每组12只.分娩后得正常仔鼠和缺氧仔鼠各12窝(每窝12~13只仔鼠).仔鼠生后8周,随机选取正常仔鼠24只,分正常仔鼠组、正常+ GM仔鼠组;缺氧仔鼠24只,分缺氧仔鼠组、缺氧+GM仔鼠组(各12只).4组仔鼠做听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)检测听功能后,麻醉处死动物,取出内耳分别做Western blot、实时定量PCR、亚硫酸氢盐测序法(BSP)甲基化检测等.结果 孕鼠动脉血气分析:缺氧组孕鼠动脉血氧分压(PaO2)、动脉血氧饱和度(SaO2)水平和正常组比较,均显著下降,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),缺氧组孕鼠与正常组间PaCO2及pH值差异均无统计学意义(P>0.05).ABR检测结果:缺氧+GM仔鼠组的ABR阈值明显高于其他3组,差异有统计学意义(P<0.01).正常+ GM仔鼠组、缺氧仔鼠组之间ABR阈值差异无统计学意义(P>0.05),但正常仔鼠组ABR阈值均低于正常+GM仔鼠组、缺氧仔鼠组,差异均有统计学意义(P<0.05).实时定量PCR检测仔鼠内耳组织GJB2 mRNA水平:缺氧+GM仔鼠组GJB2 mRNA水平明显低于其他3组,差异有统计学意义(P<0.01).正常+ GM仔鼠组、缺氧仔鼠组之间的GJB2 mRNA水平差异无统计学意义(P>0.05),但正常仔鼠组的GJB2 mRNA水平均高于正常+GM仔鼠组、缺氧仔鼠组,差异均有统计学意义(P<0.05).Western blot检测仔鼠内耳Connexin26蛋白表达的结果和GJB2 mRNA表达水平一致.甲基化测序:GJB2基因启动子岛1、岛2区域甲基化分析,缺氧+ GM仔鼠组内耳组织中的GJB2基因启动子区域岛1、岛2位点甲基化率百分比明显高于其他3组,差异有统计学意义(P<0.01).正常+ GM仔鼠组和缺氧仔鼠组的GJB2基因启动子区域岛1、岛2位点甲基化率百分比水平差异无统计学意义(P>0.05),但和正常仔鼠组比较明显升高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 妊娠期缺氧及GM可导致仔鼠听力损伤,并且有协同效应.主要是致聋基因GJB2基因启动子岛1、岛2区域甲基化水平上升,GJB2 mRNA水平下降,Connexin26蛋白表达下降.