猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP12蛋白的表达与鉴定

• 作者: 刘欢 周艳君 姜一峰 张文超 李丽薇 李慧春 杜雅楠 杨德强 童光志 虞凌雪 陈鹏飞 高飞 黄勤峰
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP12 原核表达 多抗
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 病毒
• 页码范围: 32-36
• 页数: 5页
• 分类号: S852.659.6
• 字数: 2808字
• 语种: 中文

摘要

本研究扩增了高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)HuN4株的NSP12基因,将其克隆于pCold-I载体中,获得重组质粒pCold-I-NSP12,并转化于E.coli/BL21感受态细胞,在16℃条件下用1 mmol/L的IPTG诱导20 h后,用SDS-PAGE电泳检测表达产物,结果显示在大约18 kDa处出现目标蛋白.用PRRSV特异性阳性猪血清对表达蛋白进行Western blot鉴定,结果显示该蛋白可以被PRRSV阳性猪血清识别.将重组NSP12蛋白纯化后,免疫6周龄BALB/c小鼠制备多克隆抗体.在MARC-145细胞中,对获得的NSP12多抗血清分别进行Western blot和间接免疫荧光检测(indirect immunofluorescence assay,IFA)鉴定,结果显示本研究制备的NSP12多抗血清均可与感染的MARC-145细胞的PRRSV HuN4株以及在MARC-145细胞中特异表达的NSP12蛋白发生免疫反应.PRRSV NSP12蛋白的表达及其多克隆抗体的制备为进一步研究NSP12在病毒感染过程中的作用奠定了基础.