羊口疮病毒F1L、B2L基因重组腺病毒构建及对小鼠的免疫效果分析

• 作者: 吴彩凤 张德福 张树山 戴建军 李丽 葛雷 陈晓
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 羊口疮病毒 重组腺病毒 构建 免疫效果
• 年，卷（期）: 2018,（8）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 1701-1708
• 页数: 8页
• 分类号: S852.659.1
• 字数: 5294字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2018.08.015

摘要

选取自剪切T2A和P2A肽,连接F1L和B2L基因,构建羊口疮病毒(orf virus,ORFV)重组腺病毒,并对其免疫效果进行评价,为羊口疮的疫苗研制提供依据.应用PCR扩增ORFV-F416毒株的F1L、B2L目的基因,构建重组腺病毒穿梭质粒,穿梭质粒与骨架质粒共转染HEK-293细胞,包装出ORFV重组腺病毒.将重组腺病毒感染MDBK细胞,收集上清液免疫ICR小鼠,并进行间接ELISA、淋巴细胞增殖、ORFV攻毒试验等初步评价小鼠免疫效果.结果显示:成功获得pAV-CMV-F1 L-T2A-B2L-P2 A-EGFP重组腺病毒,其TCID50为10-5.375·mL-1,PCR和IFA检测证实目的基因在基因及蛋白水平上均有表达.ORFV重组腺病毒免疫小鼠后,其抗体水平迅速升高.ORFV重组腺病毒组对特异性抗原ORFV表现出明显的T淋巴细胞增殖能力,极显著高于PBS组(P＜0.01).本文的研究结果表明:F1L和B2L基因重组腺病毒能够刺激小鼠产生体液免疫和细胞免疫应答,且未影响小鼠正常采食,保护效力较好.