PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制剂对体外培养血管瘤内皮细胞的影响

• 作者: 俞松 徐艳朋 李堂江 苏凯 赵兴 闫陶然
• 来源期刊: 中华小儿外科杂志
• 关键词: 血管瘤 细胞,培养的 PI3K/Akt/mTOR信号通路 PI3K抑制剂 mTOR抑制剂
• 年，卷（期）: 2018,（11）
• 所属期刊栏目: 临床研究
• 页码范围: 835-840
• 页数: 6页
• 字数: 5364字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-3006.2018.11.008

摘要

目的 以PI3 K/Akt/mTOR信号转导通路为靶点,观察PI3K抑制剂LY294002和mTOR抑制剂RAD001对体外培养血管瘤内皮细胞增殖与凋亡的影响,并检测PI3K/Akt/mTOR信号轴中效应分子以探讨血管瘤消长的分子机制.方法 采用组织块结合酶消化法培养血管瘤内皮细胞、传代培养,并用第Ⅷ凝血因子相关抗原对其鉴定.待细胞处于对数生长期,使用无血清培养孵育48h行同步化处理后,分别加入RAD001、LY294002及RAD001+ LY294002作为干预组,加入完全内皮细胞培养基作为空白对照组.以上4组继续孵育24h后收集细胞,采用蛋白免疫印迹方法检测各组细胞p-Akt、p-mTOR、p-ERK及p-eIF4E蛋白的表达,流式细胞仪检测各组细胞的周期分布及凋亡率,分析p-Akt、p-mTOR、p-ERK及p-eIF4E蛋白的表达水平与血管瘤内皮细胞周期及凋亡变化的相关性.结果 1.RAD001、LY294002及RAD001+ LY294002干预24 h后,内皮细胞凋亡率分别为(13.80±1.73)％、(15.03±1.05)％、(36.06±2.67)％,较对照组(3.90±0.20)％有明显升高,差异具有统计学意义(t=-9.82,-18.03,-20.82,P＜0.01),且RAD001+LY294002组凋亡率显著高于对照组、LY294002组、RAD001组(t=-20.82,-12.12,-12.7,P＜0.01);G0/G1期细胞比例分别为(74.29±1.59)％、(74.57±0.59)％、(82.28±3.01)％,较对照组(67.15±1.49)％有明显升高,差异具有统计学意义(t=-5.67,-8.02,-7.79,P＜0.01),且RAD001 +LY294002组高于对照组、LY294002组、RAD001组(t=-7.79,-4.35,-4.06,P＜0.05).2.蛋白免疫印迹检测显示,RAD001干预后,p-Akt、p-ERK、p-eIF4E蛋白表达分别为(0.75±0.04)、(0.54±0.08)、(1.50±0.34),较对照组(0.43±0.08)、(0.27±0.04)、(0.84±0.17)增加,差异具有统计学意义(t=-6.13,-5.49,-3.03,P＜0.05);p-mTOR(0.40±0.04)比对照组(0.77±0.07)明显降低,差异具有统计学意义(t=7.91,P＜0.01).LY294002干预后,p-Akt、p-ERK、p-eIF4E、p-mTOR蛋白表达分别为(0.31±0.08)、(0.26±0.04)、(0.78±0.18)、(0.42±0.05),与对照组比较,蛋白表达有一定下降趋势,但差异无统计学意义(t=2.01、0.23、0.41、6.75,P＞0.05);RAD001+ LY294002干预后,p-Akt、p-ERK、p-eIF4E、p-mTOR蛋白表达分别为(0.32±0.09)、(0.23±0.04)、(0.50±0.13)、(0.27±0.03),与对照组比较,p-eIF4E、p-mTOR蛋白表达下降,差异有统计学意义(t=2.77、10.97,P＜0.05),p-Akt、p-ERK蛋白表达差异无统计学意义(t=1.70、1.10,P＞0.05),与LY294002组,p-mTOR蛋白表达下降,差异有统计学意义(t=4.42,P＜0.05),p-Akt、p-ERK、p-eIF4E蛋白表达无统计学意义(t=-0.15、0.92、2.16,P＞0.05),与RAD001组比较,均有明显降低,差异具有统计学意义(t=7.37、6.47、4.75、4.87,P＜0.01).结论 mTOR抑制剂RAD001可引起p-Akt、p-ERK及p-eIF4E的负反馈激活;RAD001+ LY294002对体外培养血管瘤内皮细胞的干预效果优于单独使用RAD001或LY294002,且可避免RAD001引起的负反馈激活.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	俞松	遵义医学院附属医院小儿矫形外科	70	324	10.0	12.0
2	李堂江	遵义医学院附属医院小儿矫形外科	17	135	7.0	11.0
3	徐艳朋	遵义医学院附属医院小儿矫形外科	19	71	5.0	7.0
4	闫陶然	遵义医学院附属医院小儿矫形外科	4	10	3.0	3.0
5	赵兴	遵义医学院附属医院小儿矫形外科	5	7	2.0	2.0
6	苏凯	遵义医学院附属医院小儿矫形外科	4	7	2.0	2.0