中国明对虾NHE3基因克隆及其在pH胁迫下的表达

• 作者: 何玉英 李健 李政道 王佳佳 王培春 葛倩倩
• 来源期刊: 中国水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: 中国明对虾 钠/氢交换体(NHE) 基因克隆 pH胁迫 RNA干扰
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 958-966
• 页数: 9页
• 分类号: S963
• 字数: 5897字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1118.2018.17355

摘要

为研究钠/氢交换体(Na+/H+-exchanger,NHE)在中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)响应pH胁迫过程中发挥的作用,首先采用静水毒性实验方法确定了中国明对虾酸碱半致死pH,然后利用RACE技术克隆了中国明对虾Na+/H+-exchanger isoform 3(命名为FcNHE3)基因,并通过荧光定量PCR及RNA干扰技术分析了其在pH胁迫下的表达特征及功能.结果显示,72 h酸性半致死pH和碱性半致死pH分别为5.2和9.1.克隆获得FcNHE3基因(GenBank:MF373587)cDNA序列全长3508 bp,开放阅读框2805 bp,编码934个氨基酸,具有信号肽和12个跨膜结构域;蛋白同源分析发现,FcNHE3与青蟹(Carcinus maenas)同源性最高,达到74％;系统进化分析显示,FcNHE3与三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)和青蟹亲缘关系最近.荧光定量PCR分析表明,FcNHE3基因在鳃组织中表达量显著高于其他组织(P<0.05);酸性半致死pH(pH 5.2)胁迫下,FcNHE3基因在整个胁迫过程中显著上调表达(P<0.05);碱性半致死pH(pH 9.1)胁迫下,FcNHE3基因在前48 h显著下调表达(P<0.05),12 h表达量最低,仅在72 h出现上调表达.RNA干扰后,FcNHE3基因表达受到抑制,pH 5.2胁迫下对虾存活率相比对照组显著下降.研究表明相较于高pH胁迫,FcNHE3基因在中国明对虾响应低pH胁迫过程中可能发挥更重要的调节作用.