共抑制RAD18和REV1基因显著增加顺铂对肺癌细胞的毒性

• 作者: 李坚 袁荣霞 金君
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 肺癌细胞 顺铂 耐药 RAD18 REV1 siRNA
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 109-116
• 页数: 8页
• 分类号: R730.54|R734.2
• 字数: 6422字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13312/j.issn.1671-7783.y170320

摘要

目的:探讨采用基因敲减技术抑制跨损伤合成(translesion synthesis,TLS)通路和范可尼贫血(Fanconi anemia,FA)通路上游的RAD18基因与TLS通路的REV1基因后增加顺铂对人肺腺癌耐药细胞株(A549/DDP)细胞毒性的可行性及其机制.方法:蛋白质印迹法测定顺铂诱导的A549和A549/DDP细胞RAD18和REV1蛋白表达;应用脂质体转染试剂转染针对RAD18基因的siRNAs(RAD18-siRNA),检测A549/DDP细胞转染前后顺铂诱导的FANCD2和PCNA蛋白单泛素化水平;CCK-8法检测分别转染RAD18-siRNA、REV1-siRNA以及两者共转染前后经顺铂处理的A549/DDP细胞的增殖率;流式细胞术检测转染前后A549/DDP细胞凋亡率和细胞周期.结果:A549/DDP细胞转染RAD18-siRNA和REV1-siRNA后,RAD18和REV1蛋白表达明显降低,表明转染有效,基因敲减成功.转染RAD18-siRNA后顺铂诱导的FANCD2和PCNA蛋白的单泛素化水平明显下降,提示FA通路和TLS通路的激活受到抑制.分别转染RAD18-siRNA或REV1-siRNA均可增强顺铂对A549/DDP的细胞毒性,增加顺铂诱导的细胞凋亡率,并增强细胞周期S/G2期的阻滞效应.共转染RAD18-siRNA和REV1-siRNA后,顺铂对A549/DDP细胞的毒性增强作用较单转染更为显著,顺铂诱导的细胞凋亡进一步增加.结论:敲减A549/DDP细胞的RAD18和REV1基因可通过抑制FA通路和TLS通路的DNA损伤修复功能,增加A549/DDP细胞对顺铂的敏感性;RAD18和REV1基因共敲减对顺铂的这一增敏作用更加明显,显示出A549/DDP细胞对顺铂耐药的逆转效应.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李坚	江苏大学附属医院呼吸内科	80	338	9.0	12.0
2	袁荣霞	江苏大学附属医院呼吸内科	4	7	2.0	2.0
3	金君	江苏大学附属医院呼吸内科	3	13	2.0	3.0