牛病毒性腹泻病毒RT-PCR方法的建立

• 作者: 张凯 张康 张景艳 李建喜 王丹阳 王旭荣 王磊
• 来源期刊: 中国奶牛
• 学科: 农学
• 关键词: 牛病毒性腹泻病毒 5′UTR基因 一步法RT-PCR 诊断
• 年，卷（期）: 2018,（10）
• 所属期刊栏目: 奶牛保健
• 页码范围: 32-35
• 页数: 4页
• 分类号: S858.23
• 字数: 2886字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19305/j.cnki.11-3009/s.2018.10.008

摘要

根据GenBank中登录的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)5′UTR基因序列,设计合成了1对特异性引物,建立了BVDV的RT-PCR检测方法.该方法从BVDV标准毒株NADL中扩增出了279bp的特异性片段,而对猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛轮状病毒、MDBK细胞等的扩增结果均为阴性.经对标准毒株的细胞毒进行检测,其敏感度达10-1×TCID50.提取9份细胞毒总RNA后,进行一步法RT-PCR扩增可获得一致的检测结果,说明该方法重复性很好.应用该方法对45份临床疑似患牛的样品进行检测,结果检出4份阳性,表明该方法具有较好的临床应用性,且检测结果与参考实验室检测结果完全相符,可用于BVDV的快速诊断.