家蚕核型多角体病毒多角体蛋白的多克隆抗体制备及应用试验

• 作者: 潘敏慧 胡志刚 董战旗 董非凡 蒋亚明
• 来源期刊: 蚕业科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 家蚕核型多角体病毒 多角体蛋白 多克隆抗体 亚细胞定位 表达时相
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 398-403
• 页数: 6页
• 分类号: Q523+.3|Q786
• 语种: 中文
• DOI: 10.13441/j.cnki.cykx.2018.03.007

摘要

杆状病毒(baculovirus)多角体蛋白(polyhedrin)是晚期高水平表达的蛋白质,对于维持病毒粒子在自然环境下的稳定性和在宿主之间的传播至关重要.PCR扩增家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)多角体蛋白基因polh,亚克隆到原核表达载体pET32,获得重组质粒pET32-polh,并转化至大肠埃希菌(Escherichia coli) BL21 (DE3)表达菌株进行原核表达,诱导表达的融合蛋白带His标签,经镍柱纯化后用于免疫新西兰大白兔,制备抗多角体蛋白的多克隆抗体.Western blot检测该多克隆抗体能够特异识别BmNPV的多角体蛋白.利用该多克隆抗体进行免疫荧光和Western blot分析多角体蛋白的亚细胞定位及表达时相,结果显示多角体蛋白定位于细胞质,且在病毒感染后48 h才可以被检测到.该多克隆抗体可用于BmNPV多角体蛋白的功能研究.