内生真菌链格孢菌醋酸乙酯提取物对大肠杆菌抑菌机制的研究

• 作者: 冷非凡 杨光瑞 王帆 王永刚 王鸣刚 陈吉祥 马建忠 马雪青
• 来源期刊: 中草药
• 学科: 医学
• 关键词: 大肠杆菌 白毛蛇 内生真菌 链格孢菌 抗菌机制 细胞膜通透性 细胞膜结构 DNA损伤
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 药理与临床
• 页码范围: 374-381
• 页数: 8页
• 分类号: R285.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2018.02.017

摘要

目的 研究分离白药用植物白毛蛇Humata tyermanni的内生真菌链格孢菌发酵产物醋酸乙酯提取物(B06e)对大肠杆菌的抑菌机制.方法 采用倍比稀释法测定了B06e对大肠杆菌的最低抑菌浓度(MIC);测定了B06e作用前后大肠杆菌培养液电导率、核酸和蛋白质的变化;结合流式细胞仪、扫描电子显微镜、凝胶阻滞实验、圆二色谱和荧光实时定量PCR的分析方法研究了B06e对大肠杆菌细胞膜结构、形态、DNA的影响.结果 B06e对大肠杆菌的MIC为25 μg/rnL,3×MIC处理组的电导率是对照组的1.01倍;3×MIC处理组的β-半乳糖苷酶活性是对照组的11.6倍;流式细胞仪分析表明3×MIC处理组被碘化丙啶(PI)染色的阳性细胞比是对照组的286.5倍;扫描电子显微镜结果显示,B06e处理后菌体表面变得粗糙,细胞膜大量塌陷;以上结果说明B06e能增大细胞膜的通透性,破坏细胞膜的完整性.凝胶阻滞、圆二色谱的结果表明,B06e能够以嵌插的方式与DNA结合,但不能降解DNA;实时定量PCR结果表明,经B06e处理后recA和recN基因的表达量分别是对照组的2.9和3.7倍,说明B06e能破坏DNA的结构,迫使大肠杆菌启动了SOS修复.结论 B06e通过破坏大肠杆菌细胞膜完整性和DNA的结构,使得细菌代谢紊乱,最终导致细菌丧失了生长繁殖的能力.