热休克蛋白27介导多发性骨髓瘤U266细胞对硼替佐米的耐药

• 作者: 吴文冰 尚晋 王志红 陈为民 陈志忠 魏天南
• 来源期刊: 肿瘤
• 学科: 医学
• 关键词: 多发性骨髓瘤 HSP27热休克蛋白质类 硼替佐米 抗药性 肿瘤
• 年，卷（期）: 2018,（12）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1106-1116
• 页数: 11页
• 分类号: R733.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3781/j.issn.1000-7431.2018.11.562

摘要

目的:研究多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞中热休克蛋白27(heat shock protein 27,HSP27)表达水平,并探讨其与硼替佐米(bortezomib,BTZ)耐药的相关性.方法:分别采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测22例MM患者(12例为初治患者,10例为含硼替佐米方案治疗后复发患者)骨髓瘤细胞(CD38 +/CD138+浆细胞)中HSP27 mRNA和蛋白表达水平.建立对硼替佐米耐药的U266/BTZ细胞株,CCK-8法检测不同浓度的BTZ、多柔比星和依托泊苷对亲本U266细胞和耐药U266/BTZ细胞增殖活力的影响,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测U266和U266/BTZ细胞中HSP27 mRNA和蛋白的表达水平.采用siRNA干扰技术沉默U266/BTZ细胞中HSP27基因的表达水平,FCM法检测沉默HSP27基因表达对BTZ诱导U266/BTZ细胞凋亡的影响.采用BTZ单药或联合p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activate protein kinase,MAPK)信号通路抑制剂SB203580处理U266细胞,蛋白质印迹法检测细胞中HSP27、磷酸化-HSP27 (phospho-HSP27,p-HSP27)、p38 MAPK和p-p38 MAPK蛋白的表达水平.最后,构建重组慢病毒pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-T2A-Puro/HSP27并将其感染U266细胞使HSP27基因过表达,采用荧光底物法检测不同浓度的BTZ对U266细胞中20S蛋白酶体活性的影响.结果:复发MM患者骨髓瘤细胞中HSP27 mRNA和蛋白的表达水平明显高于初治MM患者(P值均＜0.01).成功构建对BTZ耐药的骨髓瘤细胞株,与亲本U266细胞相比,BTZ、多柔比星和依托泊苷对耐药U266/BTZ细胞的半数抑制浓度(half-maximal inhibitory concentration,IC50)均明显提高(P值均＜0.01),U266/BTZ细胞中HSP27 mRNA和蛋白表达水平均明显上调(P值均＜ 0.01).沉默HSP27基因表达可显著提高BTZ诱导的U266/BTZ细胞的凋亡率.BTZ单药处理可上调U266细胞中HSP27、p-HSP27和p-p38 MAPK蛋白的表达水平;与BTZ单药组相比,SB203580联合BTZ组U266细胞中HSP27、p-HSP27和p-p38 MAPK蛋白的表达水平均明显下调(P值均＜0.01).HSP27基因过表达可显著减弱BTZ对U266细胞中20S蛋白酶体活性的抑制作用(P值均＜0.01).结论:HSP27表达与MM细胞对BTZ耐药密切相关,这可能与BTZ暴露活化p38 MAPK信号通路上调HSP27表达,从而反馈性减弱BTZ对蛋白酶体活性的抑制有关.