齐口裂腹鱼HMGB1基因克隆及其对嗜水气单胞菌胁迫的响应

• 作者: 刘佳喜 彭爽 李志琼 欧阳萍 汪开毓 王艳 王虹 耿毅 陈德芳 黄小丽
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 齐口裂腹鱼 嗜水气单胞菌 高迁移率蛋白B1 免疫响应
• 年，卷（期）: 2018,（12）
• 页码范围: 1957-1966
• 页数: 10页
• 分类号: Q785|S917.4
• 字数: 5913字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11964/jfc.20180411240

摘要

为了解齐口裂腹鱼高迁移率蛋白B1(Schizothorax prenanti high mobility group box 1,SpHMGB1)的序列特征及其与嗜水气单胞菌胁迫的相关性,实验根据齐口裂腹鱼脾脏TSA库中获得的序列设计引物,采用克隆技术克隆SpHMGB1的核心序列并进行生物信息学分析,采用实时荧光定量PCR(qPCR)技术检测嗜水气单胞菌在体和离体胁迫后组织和巨噬细胞中SpHMGB1的响应情况.序列分析结果显示,SpHMGB1开放阅读框长为615 bp,编码204个氨基酸,理论分子量为23.5 ku,等电点为6.79,包含2个基本的HMG盒:A盒和B盒,以及一个酸性尾巴.SpHMGB1二级结构主要由47.06％的α-螺旋和50％的无规则卷曲构成.系统进化树分析显示,SpHMGB1与鱼类HMGB1聚为一支,与斑马鱼和鲫的亲缘关系最近,氨基酸一致性分别为90.7％和90.4％.qPCR检测结果显示,嗜水气单胞菌感染后SpHMGB1具有不同的时空表达趋势,其中血液在72 h表达量最高,肾脏在6 h表达量最高,脾脏在120 h表达量最高;热灭活嗜水气单胞菌刺激巨噬细胞后,SpHMGB1的表达量在0.5～24 h下调,24 h表达量最低,细胞因子IL-1β和TNF-α表达量均有上调趋势.qPCR检测结果提示,SpHMGB1可能参与齐口裂腹鱼细菌感染后的免疫响应.本实验可为进一步研究SpHMGB1在齐口裂腹鱼细菌性疾病中的免疫调节机制提供参考.