相对荧光定量法检测人体2',5'-寡聚腺苷酸合成酶相对表达水平

• 作者: 付洁 孙家鹏 孙诗琪 宋海峰 张晶 王芳 章良弼 邢美杰 陆春燕
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 医学
• 关键词: 荧光相对定量法 2',5'-寡聚腺苷酸合成酶 药效学 生物标志物
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 78-83
• 页数: 6页
• 分类号: Q502|R96
• 字数: 4325字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2018.01.015

摘要

目的:建立相对荧光实时定量法(RT-QPCR 2-△△Ct),考察聚乙二醇化重组人干扰素α2b注射液临床Ⅰ期试验中给药后外周全血中2',5'-寡聚腺苷酸合成酶(2',5'-OAS)相对药前点的相对表达水平变化.方法:根据GenBank中查询的2',5'-OAS的序列构建质粒,并纯化定量作为方法标准品,制作标准曲线及验证样品,考察该方法的准确度及精密度;采用RT-QPCR 2-△△Ct方法,以个体药前样品为对照,GAPDH为内参,比较考察给予聚乙二醇化重组人干扰素α 2b注射液(受试品160 μg/人)与阳性对照药派罗欣(180 μg/人)后外周血中2',5'-OAS mRNA表达变化倍数;同时,基于ELISA方法对2',5'-OAS蛋白浓度表达进行分析.结果:2',5'-OAS标准曲线有相对较好的线性(R2=0.99),cDNA 2',5'-OAS与2',5'-OAS标准品的PCR产物熔解曲线温度一致,说明引物特异性好.2个剂量组中mRNA表达水平均在20 h左右达到峰值,其中160 μg剂量组中峰浓度较高.ELISA检测血清中2',5'-OAS浓度无明显变化.结论:与传统蛋白水平检测的ELISA方法相比,RT-QPCR 2-△△Ct灵敏度较高,可以作为一种检测外周全血中生物标志物的替代方法,以给予药效学研究的临床支持.