利用非天然氨基酸代谢掺入法检测新生成蛋白

• 作者: 刘宁 孙万春 孙宁宁 崔秀雲 谢小娜 赵晴
• 来源期刊: 分析化学
• 关键词: 新生成蛋白 非天然氨基酸 肿瘤坏死因子α 点击化学
• 年，卷（期）: 2018,（11）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1808-1813
• 页数: 6页
• 字数: 4168字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11895/j.issn.0253-3820.171035

摘要

以脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激Raw264.7细胞产生肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factorα,TNF-α)为模型体系,建立了非天然氨基酸代谢掺入法检测特定新生成蛋白的方法.通过代谢掺入的方法,使细胞中的蛋白质,特别是新生成的蛋白质一级结构中掺入非天然氨基酸,即带有叠氮基团的甲硫氨酸类似物(Azidohomoalanine,AHA).考察了在不同浓度的LPS和FBS,以及不同的刺激时间等条件下,LPS刺激Raw264.7细胞产生TNF-α的实验参数,确定了最优的实验条件为:在含有1％胎牛血清的无甲硫氨酸(Met)的DMEM培养基中,分别在不加LPS和加10 ng/mL的LPS条件下刺激Raw264.7细胞4 h,在刺激细胞的同时掺入AHA.利用Cu+催化的叠氮基团与带有生物素(Biotin)标签的炔烃基团的环加成反应,使蛋白质标记上Biotin标签.利用吸附在固相载体上的抗体特异性捕获TNF-α分子,再用耦联辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase,HRP)的链霉亲和素(Streptavidin)对TNF-α分子上的Biotin进行识别,实现对特定的新生成蛋白质(TNF-α)进行检测.本方法为检测特定微量新生成蛋白、表征特定蛋白质的周转等研究提供了新的思路法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵晴	吉林大学中日联谊医院神经内科	60	420	11.0	18.0
2	刘宁	吉林大学第二医院研究中心教育部人兽共患病研究重点实验室	60	145	6.0	7.0
3	孙宁宁	吉林大学第二医院研究中心教育部人兽共患病研究重点实验室	7	18	2.0	4.0
4	孙万春	吉林大学第二医院研究中心教育部人兽共患病研究重点实验室	5	14	2.0	3.0
5	崔秀雲	吉林大学第二医院研究中心教育部人兽共患病研究重点实验室	1	1	1.0	1.0
6	谢小娜	吉林大学第一医院内分泌科	1	1	1.0	1.0