泥鳅抗菌肽在毕赤酵母SMD1168中的高效表达及活性检测

• 作者: 何小燕 姜金融 尚海 李婷 王霞 范桃桃 薛林贵 谢长庚 陈熙明 马萍
• 来源期刊: 微生物学通报
• 关键词: 泥鳅抗菌肽 毕赤酵母 发酵 抑菌活性 溶血活性 耐酸碱
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 工业微生物学
• 页码范围: 970-980
• 页数: 11页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13344/j.microbiol.china.170560

摘要

[背景]泥鳅抗菌肽Misgurin是泥鳅非特异性免疫防御系统的重要组成部分,具有广谱和较强的抗菌能力,所以获得大量抗菌肽是很有必要的.[目的]为了实现高效表达泥鳅抗菌肽Misgurin.[方法]将泥鳅抗菌肽的目的基因与pPIC9K表达载体连接,构建重组表达质粒pPIC9K-misgurin,Sal酶切线性化,再通过电击法将其整合到毕赤酵母SMD 1168染色体上.在MD固体培养基挑选阳性克隆子到MD液体培养基中,30℃、200 r/min摇瓶培养96 h,转接到BMMY液体培养基进行诱导表达,每隔24 h加入5％的甲醇.通过比较抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌抑菌圈直径的大小,筛选出活性较高的菌株pPIC9K-misgurin-22.将该菌株在100 L的发酵罐中诱导表达,48 h后进行活性检测.[结果]经Tricine-SDS-PAGE蛋白胶检测和质谱分析鉴定,pPIC9K-misgurin-22菌株诱导表达的活性物质为抗菌肽Misgurin.发酵罐发酵48 h相对于摇瓶发酵48 h,抗大肠杆菌的生物效价提高了1.47倍,抗金黄色葡萄球菌的生物效价提高了1.43倍;抗菌肽Misgurin对鲍曼不动杆菌、沙门氏菌有较弱的抗菌活性,对致病菌产气荚膜梭菌和益生菌如枯草芽孢杆菌、粪肠球菌、乳酸菌没有抗菌活性,无明显溶血活性;当温度达到90℃时发酵液的抗菌活性明显减弱,调发酵液的pH值在1.0-12.0之间都有抗菌活性;加入胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白酶K后抗菌活性减弱.[结论]获得了一株在毕赤酵母中表达量较高、有工业化生产潜力的产抗菌肽Misgurin的菌株.