白木香AsMAPK3基因的原核表达及其在洋葱表皮瞬时表达体系中的定位研究

• 作者: 吕菲菲 孙佩文 徐艳红 田美慧 魏建和
• 来源期刊: 中草药
• 学科: 医学
• 关键词: 白木香 MAPK 原核表达 瞬时表达 大肠杆菌
• 年，卷（期）: 2018,（9）
• 所属期刊栏目: 药材与资源
• 页码范围: 2133-2139
• 页数: 7页
• 分类号: R282.12
• 语种: 中文
• DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2018.09.024

摘要

目的 构建国产沉香基原植物白木香AsMAPK3基因的原核表达载体,诱导重组蛋白正确表达,并研究AsMAPK3的亚细胞定位情况,为抗体制备准备材料,为筛选其互作蛋白及进一步研究其功能奠定基础.方法 通过PCR方法克隆AsMAPK3基因的部分编码序列,构建重组原核表达载体pET-28a-AsMAPK3,并诱导蛋白表达.克隆AsMAPK3基因全长编码区,构建绿色荧光蛋白(GFP)瞬时表达载体pAN580-AsMAPK3,通过基因枪法转化洋葱表皮,荧光显微镜观察GFP的发光情况.结果 含有重组表达载体的大肠杆菌BL21 (DE3)在37℃经0.5 mmol/L异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导4h后,可获得相对分子质量约为39 000的融合蛋白,该融合蛋白在上清和包涵体中均有表达.瞬时转化洋葱表皮的GFP荧光观察发现,AsMAPK3主要在细胞核和质膜表达.结论 成功实现了AsMAPK3的体外表达和纯化,明确了AsMAPK3的亚细胞定位,为后续开展其功能研究奠定了基础.