PLCε沉默后通过Wnt/β-catenin信号通路抑制比卡鲁胺耐药的前列腺癌细胞增殖

• 作者: 张尧 李罗 牛凌芳 罗春丽 范佳鑫 范砚茹 高英英
• 来源期刊: 肿瘤
• 学科: 医学
• 关键词: 前列腺肿瘤 抗药性,肿瘤 细胞增殖 Wnt信号通路 比卡鲁胺 PLCε
• 年，卷（期）: 2018,（8）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 761-771,791
• 页数: 12页
• 分类号: R737.25
• 语种: 中文
• DOI: 10.3781/j.issn.1000-7431.2018.11.109

摘要

目的:探讨磷脂酰肌醇特异性磷脂酶Cε (phosphoinositide-speci c phospholipase Cε, PLCε) 对前列腺癌细胞增殖和比卡鲁胺敏感性的影响及其对Wnt/β-catenin信号通路的调控作用.方法:采用比卡鲁胺浓度递增及间歇诱导法建立对比卡鲁胺耐药的前列腺癌B-LNCAP细胞.应用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测前列腺癌LNCAP和B-LNCAP细胞中雄激素受体 (androgen receptor, AR) 和PLCεmRNA和蛋白的表达, CCK-8法检测LNCAP和B-LNCAP细胞对比卡鲁胺的敏感性.将干扰PLCε表达的重组慢病毒LV-shPLCε或阴性对照 (negative control, NC) LV-NC感染B-LNCAP细胞 (称为LVshPLCε/B-LNCAP或LV-NC/B-LNCAP), Wnt/β-catenin信号通路激活剂AZD2858处理LV-shPLCε/B-LNCAP细胞, 以未进行任何干预的B-LNCAP细胞作为空白组.应用CCK-8法检测各组细胞的增殖情况及对比卡鲁胺的敏感性, 应用克隆形成实验检测各组细胞的克隆形成能力, 蛋白质印迹法检测各组细胞的细胞质和细胞核中β-catenin和AR蛋白表达水平, 实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测各组细胞中c-myc、cyclin D1mRNA和蛋白表达水平.结果:B-LNCAP细胞中PLCε、AR mRNA和蛋白的表达水平均高于LNCAP细胞 (P值均＜0.05), B-LNCAP细胞对比卡鲁胺的耐药系数为132.87, 成功构建前列腺癌耐药细胞B-LNCAP.LV-shPLCε/B-LNCAP细胞增殖和克隆形成能力均弱于空白组和LV-NC/B-LNCAP组 (P值均＜0.01), 比卡鲁胺对LV-shPLCε/B-LNCAP细胞的半数抑制浓度 (half maximal inhibitory concentration, IC50) 值均低于空白组和LV-NC/B-LNCAP组 (P值均＜0.05), LV-shPLCε/B-LNCAP细胞核中β-catenin和AR蛋白表达水平明显低于空白组和LV-NC/B-LNCAP组 (P值均＜0.01), LVshPLCε/B-LNCAP细胞中c-myc、cyclin D1 mRNA和蛋白的表达水平均低于空白组和LV-NC/B-LNCAP组 (P值均＜0.01);AZD2858处理的LVshPLCε/B-LNCAP细胞增殖和克隆形成能力强于LV-shPLCε/B-LNCAP细胞 (P值均＜0.05), 比卡鲁胺对AZD2858处理的LV-shPLCε/B-LNCAP细胞IC50值高于未处理的LV-shPLCε/B-LNCAP细胞 (P＜0.05), AZD2858处理的LV-shPLCε/B-LNCAP细胞核中β-catenin和AR蛋白表达水平均高于LV-shPLCε/B-LNCAP细胞 (P值均＜0.05), AZD2858处理的LV-shPLCε/B-LNCAP细胞中c-myc、cyclin D1 mRNA和蛋白表达水平均高于LV-shPLCε/B-LNCAP细胞 (P值均＜0.05) .结论:PLCε下调后通过抑制Wnt/β-catenin信号通路, 增强前列腺癌B-LNCAP细胞对比卡鲁胺的敏感性, 抑制前列腺癌B-LNCAP细胞的增殖.