改造大肠杆菌卟啉代谢途径对重组过氧化物酶活性的影响

• 作者: 丁涛 白林含 黄莘 黄非
• 来源期刊: 微生物学报
• 关键词: 中度嗜盐菌 过氧化物酶CAT-POD 原核表达 卟啉代谢
• 年，卷（期）: 2018,（9）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1605-1613
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20170544

摘要

[目的]原核表达某些需辅因子的外源蛋白时往往酶活偏低, 为提高酶活和减少外加辅因子的成本, 我们尝试在大肠杆菌中表达外源过氧化氢-过氧化物酶的同时提高大肠杆菌中与该酶辅因子相关的合成代谢.[方法]本研究克隆了中度嗜盐菌Halomonas elongata DSM2581的过氧化氢-过氧化物酶CAT-POD (catalase-peroxidase) 编码基因kat G的ORF, 构建原核表达载体p ET28a-kat G, 实现了CAT-POD在大肠杆菌中的重组表达.由于CAT-POD活性依赖其活性中心血红素, 而血卟啉是血红素的骨架, 通过构建原核表达载体p UC19-tac-hem A, 将编码5-氨基乙酰丙酸合成酶的hem A基因在大肠杆菌中过量表达, 提高卟啉的含量, 从而提高重组蛋白CAT-POD的酶活.[结果]最终的CAT酶活达到了377 U/m L, 为对照组的7.5倍.[结论]本研究为工业生产高活性CAT-POD提供了有效的方案, 也为体外重组表达含辅因子的蛋白提供可借鉴的思路.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	白林含	四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室	31	170	8.0	11.0
2	黄非	四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室	5	12	2.0	3.0
3	丁涛	四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室	5	8	2.0	2.0
4	黄莘	四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室	1	2	1.0	1.0