无神经节细胞动物模型的建立及鉴定

• 作者: 刘远梅 尚卿 金祝
• 来源期刊: 临床小儿外科杂志
• 关键词: Hirschsprung病 动物模型 大鼠 苯扎铵化合物
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 54-59
• 页数: 6页
• 字数: 3440字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-6353.2018.01.014

摘要

目的 建立一种简单、有效的无神经节细胞大鼠模型,为肠神经干细胞移植治疗先天性巨结肠提供可用的动物模型. 方法 取新生1周龄乳鼠16窝,每窝中随机取4只肛门灌注生理盐水为对照组,4只肛门灌注1％的苯扎氯铵(BAC)作为实验组,灌注后2、4、6、8周观察两组灌注后表现(饮食、活动、腹部及排便等情况)以及直肠形态;HE染色、HuD免疫荧光(IF)染色观察肠神经节形态,并计算各组大鼠肠肌间神经节的数量;qRT-PCR检测胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)以及神经型一氧化氮合酶(nNOS)的表达情况. 结果 灌注后2、4周,两组大鼠无明显异常,6周后实验组出现轻微腹胀,排便减少,至8周时腹胀明显,不排大便,伴精神萎靡,对照组大鼠无异常表现.2周、4周时两组直肠形态无异常,6周时实验组出现轻度狭窄,8周时明显狭窄,对照组未见异常改变.HE染色:术后2、4周两组直肠神经节细胞大小、形状以及数量上无明显异常(P＞0.05),6周时两组神经节细胞数量的中位数分别为3.0和6.0,两组比较差异有统计学意义(z=-5.82,P＜0.001),至8周时实验组未见肌间神经节细胞,对照组无变化.免疫荧光染色:HuD在两组大鼠肠肌间神经节中均有表达,2、4周两组无明显区别;6周时,实验组神经节细胞较对照组体积小、形态异常,至8周时,实验组已无荧光表达,对照组无改变.qRT-PCR:2、4周时两组GDNF mRNA、nNOS mRNA均无明显差异(P＞0.05),6、8周时实验组GDNF mRNA比对照组明显降低(0.06 ±0.03 vs 1.05士0.32;0.39±0.24 vs 1.02±0.22),经统计学分析差异有意义(P＜0.001),8周时GDNF mRNA的表达量较6周时明显升高,经统计学分析差异有意义(P ＜0.001);6、8周时实验组nNOS mRNA比对照明显降低(0.54 ±0.33 vs 1.14±0.50;0.40 ±0.24 vs 1.03±0.26),经统计学分析差异有意义(P＜0.001). 结论 直肠灌注BAC可以导致大鼠直肠神经节细胞完全缺如,GDNF以及nNOS异常表达可能与HD发生有关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘远梅	遵义医学院附属医院小儿普胸泌科	66	323	11.0	14.0
2	金祝	遵义医学院附属医院小儿普胸泌科	25	103	6.0	8.0
3	尚卿	新乡市中心医院小儿外科	3	7	1.0	2.0