甜菊葡萄糖苷转移酶基因SrUGT76G1启动子的克隆及其功能的瞬时表达分析

• 作者: 佟海英 刘清泉 原海燕 孙玉明 张永侠 徐晓洋 杨永恒 王银杰 黄苏珍
• 来源期刊: 江苏农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 甜菊 SrUGT76G1启动子 调控元件 植物表达载体 基因瞬时表达
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 27-33
• 页数: 7页
• 分类号: S566.901
• 字数: 5971字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15889/j.issn.1002-1302.2018.06.007

摘要

甜菊苷(stevioside,St)和莱鲍迪苷A(rebaudiosideA,R-A)是甜菊叶片中两大主要糖苷组分,甜菊糖苷生物合成途径的研究表明SrUGT76G1基因在St向R-A转化中起关键作用.为了进一步研究SrUGT76G1基因的表达调控,本试验采用hiTAIL-PCR的方法,经过2次步移从甜菊基因组中克隆到SrUGT76G1基因翻译起始位点上游2 283 bp的启动子序列.采用PlantCARE、PLACE等在线工具对序列进行分析,结果显示在这段序列上共有475个顺式调控元件,除了TATA-box、CAAT-box、MYB结合位点等典型的保守元件外,还包括光照、干旱、厌氧等环境因子响应元件,生长素、赤霉素等植物激素响应元件,芽、胚乳等组织特异性表达元件等.为了初步研究SrUGT76G1基因启动子的功能,本试验通过克隆SrUGT76G1转录起始位点上游1 989 bp带酶切位点的序列,将其替换植物表达载体pCAMBIA1301-220中的CaMV35S启动子,连接下游的GUS报告基因,构建重组植物表达载体pCAMBIA1301-220-SrUGT76G1P,以pCAMBIA1301-220载体作对照,通过农杆菌(EHA105)真空渗透法转入拟南芥和甜菊幼苗.瞬时表达结果表明,该SrUGT76G1启动子序列能驱动GUS基因在拟南芥和甜菊叶片中表达,具有启动子活性.