猪PEDV与PDCoV二重RT-PCR检测方法的建立

• 作者: 万鹏程 孔维欢 王晶晶 石国庆
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: PEDV PDCoV RT-PCR 临床诊断
• 年，卷（期）: 2018,（11）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 205-209
• 页数: 5页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0365

摘要

旨在建立能同时检测出猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)和猪丁型冠状病毒(Porcine delta corona virus,PDCoV)的二重RT-PCR检测方法.根据GenBank已收录发表的PEDV和PDCoV基因序列设计2对特异性引物,首先运用RT-PCR反应技术,通过PEDV和PDC0V病毒的目的基因的单项扩增,对反应条件进行优化.然后通过特异性试验、敏感性试验以及临床样品的检测验证确定二重RT-PCR方法的建立.结果显示,目的基因PEDV-M扩增的片段大小是750 bp,PDCoV-N扩增的片段大小是372 bp;能够同时检测出PEDV和PDCoV目的基因,却检测不到PRV、CSFV、PPV三种病毒;体系优化扩增PEDV-PDCoV混合核酸浓度下限为100 pg/μL;能够初步诊断出临床疑似病毒感染的病例.结果表明,成功的建立PEDV-PDCoV二重RT-PCR检测方法,此方法敏感性高、特异性强,是一种能够快速有效的检测出猪PEDV-PDCoV单病毒感染或多病毒混合感染的临床诊断方法.