禽流感病毒NP蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

• 作者: 姚露 毕振威 肖倩 闫丽萍 雷静 颜焰
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: H5N6 禽流感病毒 单克隆抗体 NP蛋白 特异性 保守性
• 年，卷（期）: 2018,（12）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 53-58
• 页数: 6页
• 分类号: S852.4
• 字数: 4955字
• 语种: 中文

摘要

为了制备H5N6亚型禽流感病毒(AIV)的单克隆抗体(MAb),采用纯化的H5N6 AIV免疫BALB/c鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA方法进行筛选,获得2株能稳定分泌抗NP蛋白的杂交瘤细胞,分别命名为3D9和2B10.间接ELISA检测2株杂交瘤细胞培养上清液抗体效价分别为1∶1×103和1∶1×104,腹水的抗体效价分别达到1∶1×105和1∶1×106;3D9和2B10亚类鉴定重链为IgM,轻链为κ链;Western blot分析表明,2株杂交瘤细胞上清均能与不同的AIV感染的尿囊液在56 kD处发生特异性反应,并能与原核表达的重组NP蛋白发生特异性反应;间接免疫荧光试验显示,2株单克隆抗体均能与不同的AIV感染的MDCK细胞产生特异性反应.以上结果表明,本研究针对H5N6 AIV的NP蛋白制备了2株单克隆抗体,且都具有较好的特异性、保守性和广谱性,为今后禽流感诊断方法的开发奠定了基础.