摘要:
目的 研究巨噬细胞介导的炎性微环境对牙周膜细胞(periodontal ligament cells,PDLCs)增殖和成骨分化的影响.方法 通过1μg/mL脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)激活RAW264.7巨噬细胞得到含炎性因子的条件培养基模拟体内炎性微环境,原代分离培养PDLCs,分别在条件培养基(LPS-CM组),普通培养基(Ctrl组)下培养PDLCs,MTT法检测PDLCs的增殖情况;加入成骨诱导剂共培养3d、7d,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)试剂盒检测ALP活性,Real-time PCR检测Runt相关基因2(runt-related transcription factor 2,RUNX2)、骨钙素(osteocalcin,OCN)、Ⅰ型胶原(collagenⅠ,COL-Ⅰ)mRNA的表达,Western Blot检测RUNX2、OCN、COL-Ⅰ蛋白表达水平;成骨诱导14 d茜素红染色观察钙化结节.分析比较2组PDLCs增殖和成骨分化的差异.结果 MTT法检测,LPS-CM组PDLCs的OD值低于Ctrl组(P<0.05);相同时间点LPS-CM组的RUNX2、OCN、COL-Ⅰ基因的mRNA表达均低于Ctrl组(P<0.05),蛋白表达,除了OCN 3 d两组比较无统计学意义(t=2.75,P=0.056)外,其余显示相应的RUNX2、OCN、COL-Ⅰ的蛋白表达量LPS-CM组低于Ctrl组(P< 0.05);ALP活性检测,LPS-CM组ALP活性高于Ctrl组,分别是3d时1.58倍(t=5.91,P=0.030);7d时为1.29倍(t=6.01,P=0.046);14d钙化结节LPS-CM组少于Ctrl组,差异有统计学意义(t=8.63,P=0.048).结论 巨噬细胞介导的炎性微环境抑制PDLCs的增殖与成骨分化.