脊髓灰质炎2型病毒样颗粒在毕赤酵母内的表达与鉴定

• 作者: 彭少丹 晏巧玲 朱涛 温晔 赵辉 马金
• 来源期刊: 微生物学免疫学进展
• 学科: 医学
• 关键词: 脊髓灰质炎病毒 毕赤酵母 蔗糖密度梯度离心 病毒样颗粒
• 年，卷（期）: 2018,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 7-13
• 页数: 7页
• 分类号: R512.4
• 字数: 3921字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13309/j.cnki.pmi.2018.04.002

摘要

目的 构建可稳定表达脊髓灰质炎病毒(poliovirus,PV)类病毒颗粒(virus-like particles,VLPs)的整合型重组毕赤酵母,鉴定PV VLPs在毕赤酵母细胞中的表达及组装情况.方法 根据毕赤酵母密码子偏好性优化salk株II型P1和3CD基因并连接到pPicZA载体,构建pPicZA-P1-3CD表达载体;用Bgl II线性化pPicZA-P1-3CD载体,电转至毕赤酵母GS115中.通过Zeocin抗性筛选获得整合型重组毕赤酵母,随后用高浓度Zeocin抗性筛选得到高表达菌株.甲醇诱导后,用Western Blot检测目的蛋白表达;蔗糖密度梯度离心纯化PV VLPs并进行透射电镜观察.结果 成功构建pPicZA-P1-3CD表达载体,获得PV VLPs重组毕赤酵母.Western Blot在重组毕赤酵母裂解上清中检测到目的蛋白的表达;蔗糖密度梯度离心纯化后,在透射电镜中观察到直径为30 nm左右的VLPs,其形态与天然的PV颗粒相似.结论 成功构建PV-2型VLPs的整合型重组酵母系统,并在毕赤酵母中组装形成了VLPs,为酵母表达系统中PV VLPs疫苗的研制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱涛	天津科技大学生物工程学院	16	16	2.0	2.0
3	马金	康希诺生物股份公司新技术开发部	2	2	1.0	1.0
4	赵辉	天津科技大学生物工程学院	3	1	1.0	1.0
5	温晔	天津科技大学生物工程学院	3	4	1.0	1.0
6	彭少丹	天津科技大学生物工程学院	5	6	2.0	2.0
7	晏巧玲	康希诺生物股份公司新技术开发部	1	1	1.0	1.0