基质金属蛋白酶-9基因敲除斑马鱼模型的建立

• 作者: 张芳 李前 李行舟 汪雪雁 王永安 赵宝全 赵殿发 陈豪
• 来源期刊: 国际药学研究杂志
• 学科: 医学
• 关键词: CRISPR/Cas9 基质金属蛋白酶-9 斑马鱼
• 年，卷（期）: 2018,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 914-919,933
• 页数: 7页
• 分类号: R-332|R94-33
• 字数: 5599字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13220/j.cnki.jipr.2018.12.005

摘要

目的 建立斑马鱼基质金属蛋白酶-9(MMP9)基因敲除模型,为研究MMP9基因在阿尔茨海默病(AD)中的作用机制奠定基础.方法 根据CRISPR/Cas9的靶点设计原则,利用生物信息学方法,选取MMP9基因敲除靶点,构建gRNA质粒,将gRNA和Cas9的mRNA混合后注入AB野生型和APPsw转基因斑马鱼(APPsw+/+)的受精卵单细胞中,48 h后通过PCR、酶切及基因测序等方法验证基因敲除情况;遗传学方法传代筛选,建立斑马鱼mmp9-/-、APPsw+/+-mmp9-/-基因敲除品系;对基因敲除品系的发育、突变遗传率、突变类型和行为学等进行研究.结果 构建成功4条gRNA,m2是最佳敲除靶点,突变遗传率平均＞50％;野生型和APPsw转基因斑马鱼模型分别获得2个突变类型,APPsw+/+-mmp9-/-模型分别在敲除部位缺失4个和8个碱基,mmp9-/-缺失5个碱基和敲入5个碱基并伴有1处点突变,建立了野生型和APPsw过表达型MMP9基因敲除斑马鱼品系;F2代纯合子孵化率、幼鱼期表型和行为学检测结果与正常斑马鱼无统计学差异(P＞0.05),成鱼期开始出现学习记忆能力的变化.结论 MMP9基因的敲除能够减缓痴呆的发生发展进程,该模型的建立为AD研究提供支持.