草鱼肠巨噬细胞的分离培养与鉴定

• 作者: 房慧 李槿年 肖宁 赵雨婷 陶会竹
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 草鱼 肠巨噬细胞 分离 原代培养 鉴定
• 年，卷（期）: 2018,（10）
• 页码范围: 1606-1614
• 页数: 9页
• 分类号: S941.42
• 字数: 6693字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11964/jfc.20170910950

摘要

为了建立草鱼肠巨噬细胞的分离培养与鉴定方法,本研究在采用刮除法结合胶原酶IV消化法制备肠黏膜固有层单细胞悬液的基础上,使用鱼类脏器单核细胞分离试剂盒分离肠巨噬细胞,再经差异贴壁法纯化肠巨噬细胞,最后,用含10%胎牛血清和5%草鱼血清的RPMI 1640完全培养液,在28 °C、5% CO2条件下原代培养肠巨噬细胞,并通过细胞形态学检查、分子标记检测和功能验证实验加以鉴定.结果显示,每尾鱼(约250 g)肠巨噬细胞的获得量约为3×107个,细胞活率为99.6%,纯度达到95%以上;倒置显微镜观察发现,原代培养4~5 d的贴壁细胞多呈圆形或多边形,体积明显增大,细胞汇合度达到95%;光镜和电镜观察到染色后的贴壁细胞具有巨噬细胞的形态结构特征,贴壁细胞经荧光定量PCR在mRNA水平检测到巨噬细胞特异性标志分子(草鱼巨噬细胞集落刺激因子受体),功能实验证实贴壁细胞具有吞噬功能,脂多糖能够显著提高其呼吸暴发活性.本研究首次成功建立了草鱼肠巨噬细胞的分离培养与鉴定方法,为开展口服疫苗诱导的草鱼肠黏膜免疫应答研究提供细胞模型.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陶会竹	安徽农业大学动物科技学院兽医病理生物学与疫病防控安徽省重点实验室	5	4	1.0	1.0
2	房慧	安徽农业大学动物科技学院兽医病理生物学与疫病防控安徽省重点实验室	3	1	1.0	1.0
3	肖宁	安徽农业大学动物科技学院兽医病理生物学与疫病防控安徽省重点实验室	4	5	1.0	1.0
4	赵雨婷	安徽农业大学动物科技学院兽医病理生物学与疫病防控安徽省重点实验室	2	2	1.0	1.0