PEG介导的黑附球菌遗传转化体系的建立

• 作者: 周宏胜 张雷刚 李鹏霞 罗淑芬 胡花丽
• 来源期刊: 菌物学报
• 关键词: PEG介导 黑附球菌 遗传转化 原生质体 工程菌株
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 205-214
• 页数: 10页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13346/j.mycosystema.170166

摘要

以生防真菌黑附球菌原生质体为受体、潮霉素抗性基因(hph)为筛选标记,应用PEG介导法进行了遗传转化体系的研究.潮霉素敏感性测试结果表明,黑附球菌对潮霉素的耐受浓度为50mg/L.PEG介导的黑附球菌原生质体最佳遗传转化体系为:30℃下用2％裂解酶酶解黑附球菌菌丝2h,过滤收集原生质体,经MTC清洗重悬后将质粒pYF11-hph转化黑附球菌原生质体,在RM培养基中混匀再生;经潮霉素药剂筛选和PCR验证,表明外源基因hph已转入到黑附球菌中并获得稳定表达.本实验成功地建立了稳定的PEG介导的黑附球菌遗传转化体系,为研究其代谢途径、生防机制及构建工程菌株提供了技术保障.