利用CRISPR/Cas9系统建立斑马鱼sonic hedgehog基因敲除模型及视网膜发育表型的初步鉴定

• 作者: 姜悦 张昕 张青宇 池霞 童梅玲 郭锡熔
• 来源期刊: 东南大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: sonic hedgehog基因 CRISPR/Cas9基因敲除 斑马鱼 视网膜发育
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 977-982
• 页数: 6页
• 分类号: Q954-33
• 字数: 2548字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-6264.2018.06.008

摘要

目的:采用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立sonic hedgehog(shh)基因敲除斑马鱼模型,并初步鉴定斑马鱼视网膜发育表型.方法:针对shh基因构建向导RNA(sgRNA)表达载体并转录,利用Cas9显微注射到斑马鱼受精卵中,经DNA鉴定及PCR扩增,初步鉴定基因编辑情况.观察基因敲除的斑马鱼形态,采用HE染色观察视网膜发育情况.结果:成功构建出shh杂交突变稳定遗传的斑马鱼种系,与野生型斑马鱼相比,shha+/-突变体胚胎及幼鱼多个系统的发育受到明显影响,出现鱼卵发育停滞、脊柱弯曲、心包水肿、眼球发育较小等多种发育异常.受精后96 h,HE染色发现视网膜神经节细胞及感光细胞排列紊乱,细胞数减少,胞核变大.结论:初步建立了shh基因敲除斑马鱼模型;shh基因敲除可引起斑马鱼视网膜发育异常,为进一步探讨斑马鱼shh基因对视网膜发育影响奠定了基础.