BLM解旋酶基因的克隆、表达载体构建及表达研究

• 作者: 宋书弦 段志强 许厚强 赵佳福 陈祥
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: BLM解旋酶 基因克隆 表达载体 亚细胞定位 蛋白印迹
• 年，卷（期）: 2018,（11）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 152-159
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0461

摘要

克隆获得BLM基因全长CDS区,研究其在细胞中的表达情况.从人前列腺癌PC3细胞中提取总RNA,反转录成cDNA,采用分段克隆的方法获得BLM全长CDS区,将其定向插入到原核表达载体pET-32a和真核表达载体pEGFP-N3,构建pET-32a-BLM和pEGFP-N3-BLM.将获得的重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞或转染PC3细胞,通过SDS-PAGE、Westernblotting、荧光定位观察等方法研究人BLM解旋酶在细胞中的表达或定位.BLM解旋酶的原核表达结果显示,不同IPTG浓度对BLM解旋酶的表达量影响不大,低温有助于其表达量的提高.Western blotting检测发现,构建的人BLM解旋酶重组原核和真核表达载体分另能在大肠杆菌细胞和PC3细胞中表达出分子量约为179 kD的蛋白质,与预期分子量大小一致.荧光共定位结果显示,人BLM解旋酶主要定位在细胞核.成功克隆了人BLM解旋酶全长CDS区,且构建的重组表达载体pET-32a-BLM和pEGFP-N3-BLM能在相应的宿主细胞中正确表达.