番茄细菌性斑点病菌、溃疡病菌、青枯病菌和疮痂病菌的四重PCR检测方法

• 作者: 康华军 李宝聚 柴阿丽 石延霞 袁军海 谢学文
• 来源期刊: 园艺学报
• 学科: 农学
• 关键词: 番茄 细菌性斑点病菌 溃疡病菌 青枯病菌 疮痂病菌 四重PCR
• 年，卷（期）: 2018,（11）
• 所属期刊栏目: 新方法
• 页码范围: 2254-2264
• 页数: 11页
• 分类号: S641.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.16420/j.issn.0513-353x.2018-0153

摘要

针对引起番茄细菌性病害的细菌性斑点病菌(Pseudomonas syringae pv.tomato,Pst)、溃疡病菌(Clavibacter michiganensis subsp.michiganensis,Cmm)、青枯病菌(Ralstonia solanacearum,Rs)以及疮痂病菌(Xanthomonas campestris pv.vesicatoria,Xcv),建立了四重PCR检测技术,为病害的快速、准确诊断提供技术支持.根据gap1基因设计Pst特异性引物BW-F/BW-R,经PCR条件优化,扩增出了375 bp的特异性片段.将设计的引物与已报道的3种细菌特异性引物组合,通过设定不同的退火温度、引物浓度、循环次数以及延伸时间,探索影响四重PCR扩增的因素,优化了其反应体系.四重PCR反应体系中的引物对BW-F/BW-R、Fanl/Fan2、RS-1-F/RS-3-R和XCVF/XCVR可分别扩增出细菌性斑点病菌、溃疡病菌、青枯病菌和疮痂病菌长度为375、146、716和517 bp的特异性目的片段,反应体系退火温度为57.1℃,4对引物的终浓度分别为0.24、0.16、0.16和0.08 μmol·L-1,延伸时间45 s,35个循环.该四重PCR反应体系可快速检测田间番茄发病植株中的细菌性斑点病菌、溃疡病菌、青枯病菌和疮痂病菌,灵敏度达到10-1 ng·μL-1.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	石延霞	中国农业科学院蔬菜花卉研究所	196	1886	23.0	34.0
2	李宝聚	中国农业科学院蔬菜花卉研究所	321	3006	28.0	39.0
3	谢学文	中国农业科学院蔬菜花卉研究所	132	703	13.0	19.0
4	袁军海		14	21	3.0	3.0
5	柴阿丽	中国农业科学院蔬菜花卉研究所	90	573	11.0	20.0
6	康华军	中国农业科学院蔬菜花卉研究所	5	14	2.0	3.0