鳜胚胎细胞系的建立与应用

• 作者: 吴明林 申亚伟 赵金良 陈晓武
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鳜 细胞培养 逆转录病毒 干扰素调节因子
• 年，卷（期）: 2018,（10）
• 页码范围: 1626-1634
• 页数: 9页
• 分类号: S917.4
• 字数: 5246字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11964/jfc.20170810942

摘要

为更好地开展鳜基因功能研究和药物筛选工作,提高基因转染效率,本研究以鳜囊胚期胚胎为材料,采用含有20%胎牛血清的DMEM培养基进行培养,建立了生长稳定的鳜胚胎细胞系MFE.在此基础上,采用绿色荧光蛋白(GFP)作为标记物,在HEK293T细胞中体外包装逆转录病毒,再感染MFE细胞系.MTT法分析表明传代后细胞培养96 h内,细胞生长率变化也经历增殖、降低到达稳定期.而且MFE细胞能稳定表达GFP基因,感染效率为20%±5%,而脂质体转染效率为3%±2%.可见包装病毒感染细胞不仅能获得稳转细胞系,效率也远高于脂质体瞬时转染.荧光定量PCR分析表明, MFE细胞系能表达Irf1、 Irf3和Irf7基因, Irf1基因表达量最高. MFE细胞系受到poly I:C刺激后, Irf1、 Irf3和Irf7的表达量分别升高3.5,2.3和2.1倍.因此,MFE细胞通过病毒感染可以获得较高的转染效率,该细胞可作为鳜免疫相关基因功能研究的工具.