鲤细胞因子多克隆抗体的制备及检测

• 作者: 冯军厂 刘慧芬 常绪路 张建新 朱振祥 聂国兴 赵燕静 郭祥瑞
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鲤 细胞因子 原核表达 抗体效价 病原菌 ELISA
• 年，卷（期）: 2018,（10）
• 页码范围: 1615-1625
• 页数: 11页
• 分类号: Q786|S917.4
• 字数: 6844字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11964/jfc.20171010998

摘要

为从蛋白质水平研究细胞因子在鲤体内免疫应答过程中的合成变化,本研究采用PCR技术克隆TNF-α、 IL-1β、 IL-6、 IL-12、 IL-10和TGF-β基因含有部分抗原决定簇的片段,引入双酶切位点BamHⅠ和HindⅢ后连接至pET-32a/21a,构建相应的表达载体,制备多克隆抗体.采用 ELISA 检测抗体效价,并以此作为实验工具,检测经嗜水气单胞菌感染后鲤血清中炎性细胞因子的合成变化.结果显示,基因TNF-α、 IL-1β、 IL-6、 IL-12、 IL-10和TGF-β融合蛋白分子量分别约为31.8、31.7、35.3、32.5、18.0和33.6 ku;抗体效价达到2.4×106;在病原菌感染后的不同阶段,促炎细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-12和抗炎细胞因子IL-10、TGF-β呈现出不同的合成变化.研究表明,制备的抗体具有较高的效价、亲和力和特异性,可用于鲤细胞因子的定量研究,该抗体的获得为鲤免疫应答与细胞因子合成的系统研究奠定了基础.同时,获取的鲤细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-12、IL-10和TGF-β的抗体亦可用于其他鱼类细胞因子蛋白质水平的定量研究.