适合流式细胞仪分析的梨叶片细胞核提取缓冲液筛选

• 作者: 刘凤霞 徐凌飞 李京一 王志刚
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 流式细胞仪 细胞核解离液 DNA含量 梨 组培苗
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 研究资源与技术改进
• 页码范围: 1034-1042
• 页数: 9页
• 分类号: S661.2|Q94-33
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2018.06.014

摘要

适宜的缓冲液是制备植物完整细胞核的关键.为了筛选提取梨(Pyrus)细胞核的适宜缓冲液,本实验以新疆库尔勒香梨(Pyrus sinkiangensis)组培苗叶片为材料,用剪切法提取细胞核,综合分析五种解离液(通用缓冲液(general purpose buffer,GPB)、木本植物缓冲液(woody plant buffer,WPB)、Otto's Buffer (OTTO)、加尔布雷思缓冲液(Galbraith's buffer,Galbraith's)和改良猕猴桃解离液(N-(2-hydroxyethyl)piperazine-N'-(2-ethanesulfonic acid),4-羟乙基哌嗪乙磺酸,HEPES))制备的悬浮液细胞核形态特征、DNA相对含量和细胞核提取效率.结果显示:相比WPB、Galbraith's和HEPES这3种解离液,GPB和OTTO提取的细胞核悬浮液有较多碎片和杂质,以至于影响流式图峰值的形成;WPB、Galbraith's和HEPES这3种解离液提取的细胞核悬浮液虽然在G0/G1期均形成了呈正态分布的、变异系数小于5％的DNA相对含量直方图,但是这3种解离液中只有WPB和Galbraith's在G2/M期也形成了DNA峰;另外,从提取细胞核的效率上来看,Galbraith's解离液提取细胞核的效率高于WPB解离液.本实验筛选Galbraith's解离液为提取梨细胞核的适宜缓冲液,为后续进一步开展植物细胞学和分子生物学相关研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐凌飞	西北农林科技大学园艺学院	42	525	12.0	22.0
2	王志刚	西北农林科技大学园艺学院	30	160	6.0	11.0
3	刘凤霞	西北农林科技大学园艺学院	3	9	2.0	3.0
4	李京一	西北农林科技大学园艺学院	1	2	1.0	1.0