AF Ⅰ基因植物表达载体的构建及抗冻百合的培育

• 作者: 和四梅 张业胜 时晓菲 李艳霞 王忠凯 董扬 赵娟 颜笑洒
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 东方百合品种木门 植物表达载体 遗传转化 AF Ⅰ
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 研究资源与技术改进
• 页码范围: 1025-1033
• 页数: 9页
• 分类号: S-3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2018.06.013

摘要

百合(Lilium brownii vat.viridulum)是世界上主要的鲜切花之一,具有很高的观赏价值和经济价值.然而,低温会抑制百合的生长,严重时导致大面积减产.为提高百合抗冻能力,本研究对极地冻鱼(Anarhichas minor)的抗冻蛋白基因(antifreeze protein gene,AFPⅢ)进行植物密码子优化,合成抗冻基因(antifreeze gene,AF Ⅰ)序列.通过酶切连接的方法将AF Ⅰ基因插入Pcambia1390骨架载体,利用PCISV(Peanut chlorotic streak caulimovirus)启动子启动该基因的表达,构建了AF Ⅰ基因植物表达载体P1390-PCISV-AF Ⅰ.将载体P1390-PCISV-AF Ⅰ电击转化农杆菌(Agrobacterium)菌株EHA105,经菌落PCR检测发现载体P1390-PCISV-AF Ⅰ已经成功转化入农杆菌菌株中.通过农杆菌介导的遗传转化方法将AF Ⅰ基因转化到受体东方百合品种木门(Lily)中,经PCR鉴定,确定AF Ⅰ基因已整合到受体基因组中.抗冻实验以及半定量RT-PCR研究结果表明,转基因阳性植株相较于野生型植株在-2℃情况下具有良好的抗冻效果.本研究结果对于抗冻植物新品种的培育具有重要的参考价值.