人突触囊泡蛋白2C单克隆抗体的制备及鉴定

• 作者: 万冬梅 付楚溪 孙志杰 张惟材 汪建华 熊向华 赵鹏 邱语进 霍江
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 医学
• 关键词: 人突触囊泡蛋白2C A型肉毒毒素 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 203-207
• 页数: 5页
• 分类号: Q78|R392.1
• 字数: 2957字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2018.02.009

摘要

目的:制备人突触囊泡蛋白2C(SV2C)单克隆抗体.方法:纯化SV2C/L4蛋白,免疫BALB/c小鼠并制备杂交瘤细胞,筛选针对SV2C/L4的特异性抗体,鉴定亚型及测定效价;选取效价最高的抗体进行大量制备,并经SDS-PAGE、Western印迹、间接ELISA和动物实验对抗体纯度、特异性、亲和力及中和活性进行检测.结果:得到纯度大于95％的SV2C/L4蛋白,经2轮筛选共获得13株鼠单抗,抗体重链大多为IgG1、IgG2a型,轻链均为κ型;选取效价最高的30号抗体进行大量制备,纯化后抗体的纯度大于99％,亲和力为6.7 nmol/L,中和活性为100 LD50/mg.结论:筛得1株高亲和力、具有中和活性的特异性SV2C鼠单抗,为肉毒中毒的治疗提供了新的选择,也为阐明BoNT/A受体间的关系奠定了基础.