核转录因子κB在大骨节病患者中的表达及在软骨细胞凋亡中的作用

• 作者: 刘继锋 曹峻岭 杨晓莉 毋瑞朋 熊咏民 邹秀珍 郭浩 马敏杰
• 来源期刊: 中华地方病学杂志
• 关键词: 大骨节病 软骨细胞 NF-κB 氧化损伤 蛋白表达
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 181-185
• 页数: 5页
• 字数: 4384字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-4255.2018.03.003

摘要

目的 通过观察核转录因子κB(NF-κB)p65在大骨节病患者全血和软骨细胞(C28/I2)中的表达,分析NF-κB p65分子在软骨细胞凋亡中的作用,阐明NF-κB信号通路在大骨节病发病机制中的作用.方法采用病例-对照研究方法,从陕西省大骨节病病区旬邑、永寿、长武、麟游、千阳、陇县选择161例大骨节病患者作为病例组,同时选取性别、年龄相匹配的312名健康人作为对照组,采集病例组和对照组人群肘静脉血,乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝,用于NF-κB p65蛋白测定.采用成组设计及细胞培养方法,建立人C28/I2软骨细胞氧化损伤模型,实验分为4组:对照组、叔丁基过氧化氢(tBHP)损伤组(tBHP 300.00 μmol/L)、低硒预保护组[亚硒酸钠(Na2SeO3)0.05 mg/L + tBHP 300.00 μmol/L]、中硒预保护组(Na2SeO30.10 mg/L+tBHP 300.00 μmol/L),Hoechst 33342染色检测各组细胞凋亡情况,二氯荧光黄法检测细胞内活性氧(ROS)含量.应用Trizol法从全血和软骨细胞中提取蛋白,采用蛋白质免疫印迹法检测全血及软骨细胞中NF-κB p65信号分子的蛋白表达.结果 病例组与对照组在年龄和性别分布上差异均无统计学意义(t = 0.336,P > 0.05;χ2= 0.407, P>0.05).病例组全血中NF-κB p65蛋白表达明显升高,约为对照组的1.835倍(病例组:0.167 ± 0.026,对照组:0.091 ± 0.014;t=5.147,P<0.01).荧光显微镜下,tBHP 损伤组细胞多呈强蓝色荧光,凋亡细胞数量多;且细胞内ROS含量(1.219 ± 0.104)高于低、中硒预保护组(0.832 ± 0.077、0.635 ± 0.070,P均 <0.05).tBHP 损伤组NF-κB p65蛋白表达(1.563 ± 0.351)明显高于对照组(0.451 ± 0.069,P < 0.05);低、中硒预保护组NF-κB p65蛋白表达有低于tBHP 损伤组的趋势.结论 大骨节病患者NF-κB信号通路表达上调,NF-κB p65信号分子在氧化损伤所致的软骨细胞凋亡中具有一定作用,提示NF-κB信号通路在大骨节病发病机制中发挥了一定的作用.