高致病性猪链球菌双组分系统Ihk/Irr双基因缺失突变株的构建

• 作者: 张维瑜 李咏梅 郑美玉 韩慧明
• 来源期刊: 北华大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: Ⅱ型猪链球菌 双组分系统 Ihk/Irr 突变株
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 生物科学·基础医学·药学
• 页码范围: 327-333
• 页数: 7页
• 分类号: Q933
• 字数: 4766字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11713/j.issn.1009-4822.2018.03.009

摘要

目的 构建Ⅱ型猪链球菌05ZYH33菌株双组分系统Ihk/Irr的双基因缺失突变株.方法 首先对双组分系统 Ihk/Irr基因进行序列分析;选取Ihk/Irr基因的相关片段克隆至pET30a表达载体,进行可溶表达并注射家兔制备抗体;分别将ihk基因上游irr基因下游各1 kb的片段扩增,将两个片段连接起来;克隆至温敏型pJRS233的穿梭质粒中;利用两步同源重组法获得突变体;分别提取突变株的基因组DNA,RNA及菌体总蛋白,利用PCR, RT-PCR,Western-blot方法验证突变体.结果 成功制备了双组分系统Ihk/Irr可溶性表达的蛋白,成功构建了重组的温敏型ikr-pJRS233重组质粒,成功将重组质粒转入猪链球菌05ZYH33中并获得突变株,基因组PCR,RT-PCR及Western-blot分别证实了双组分系统Ihk/Irr双基因被成功敲除.结论 成功构建重组温敏型的穿梭质粒,导入到猪链球菌05ZYH33菌株中经两步同源重组获得突变株,在基因组DNA,RNA及蛋白水平上验证了双组分系统Ihk/Irr双基因缺失株的成功构建.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李咏梅	北华大学口腔医学院	37	99	6.0	8.0
2	张维瑜	北华大学基础医学院	10	97	2.0	9.0
3	韩慧明	北华大学基础医学院	7	57	3.0	7.0
7	郑美玉	北华大学基础医学院	2	0	0.0	0.0