双分子荧光增强法实时观察烟草BY2细胞内Ca2+信号转导

• 作者: 张学文 徐茂盛 曹哲 翟翔 赵燕 陈金军 高晗 黄丽华 黄妤
• 来源期刊: 中国细胞生物学学报
• 关键词: 钙离子 信号转导 实时观察
• 年，卷（期）: 2018,（11）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1858-1866
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.11844/cjcb.2018.11.0147

摘要

钙离子作为第二信使是细胞信号转导的重要成员,也是细胞信号转导研究的重要对象.为了更有效地实时观察植物细胞中的钙离子信号,将响应钙离子的水母素(aequorin,AEQ)基因转化到已由绿色荧光蛋白(GFP)标记的分泌载体膜蛋白SCMP2(secretive carrier membrane proteins 2)的烟草BY2细胞(SCAMP2-GFP).经过对转化细胞的筛选和分子检测,获得了双价转化的BY2细胞株.转化细胞经腔肠素处理并实时显微观察,能较清晰地观察到细胞中钙离子响应的荧光信号,水母素单价转化细胞则几乎观察不到荧光信号,说明水母素响应钙离子并作用于腔肠素所发弱荧光能进一步激发GFP荧光,使弱荧光有效增强.尽管响应钙离子的双价自激发荧光较利用外施激发光对GFP的激发荧光稍弱,但已能满足在显微镜下直接观察和采集信号的荧光强度,实现对细胞内钙离子的实时观察.通过拍照采集钙离子响应的荧光图像,在3倍于外激发的曝光时间条件下获得清晰的荧光图片.以上结果证明了双价标记法能有效地实时观察细胞的钙离子信号.对应于Aequorin与GFP融合表达的体系,双价转化法还能利用GFP不同亚细胞内定位的特定蛋白标记,对亚细胞水平的不同部位开展钙离子信号研究,体现出其优势.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张学文		120	939	18.0	24.0
2	赵燕		51	420	9.0	19.0
3	黄妤		17	44	3.0	6.0
4	黄丽华		43	339	9.0	17.0
5	陈金军		13	28	3.0	5.0
6	翟翔		1	0	0.0	0.0
7	曹哲		1	0	0.0	0.0
8	高晗		4	1	1.0	1.0
9	徐茂盛		1	0	0.0	0.0