根据相关文献以及GenBank设计真菌的特异性引物,通过引物、退火温度及时间的优化,建立犬小孢子菌(Mc)、石膏样小孢子菌(Mg)和厚皮马拉色菌(Mp)的多重PCR检测方法,用于犬皮肤病病原真菌的快速检测.经特异性和灵敏性检测后,对浦东地区宠物医院采集到的38份疑似病例样品通过真菌培养后提取DNA进行检测.结果:所建立的多重PCR方法稳定性好,可有效区分3种常见的犬皮肤病原真菌,扩增出290 bp (Mc)、460 bp (Mg)和582 bp (Mp)的目的片段,最低检测限分别为4.1、2.0和5.1 pg/μL.检测的38份临床样品中,犬小孢子菌有7例,石膏样小孢子菌2例,马拉色菌2例,经测序均验证扩增正确.由此表明,本文建立的犬皮肤病常见病原真菌多重PCR检测方法为犬真菌性皮肤病的快速检测提供了技术支持.