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抗c-Myc标签纳米抗体的筛选与应用
抗c-Myc标签纳米抗体的筛选与应用
作者:
付金衡
季艳伟
李金晶
涂追
舒梅
许菲
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
纳米抗体
c-Myc
噬菌体展示
ELISA
量子点
摘要:
目的:以c-Myc-GST蛋白为靶分子,从纳米抗体噬菌体展示免疫文库中筛选能够特异性识别c-Myc标签(EQKLISEEDL)的纳米抗体.方法:采用固相淘选技术,筛选出能与c-Myc标签特异性结合的噬菌体,phage-ELISA鉴定阳性克隆并测序,通过基因重组技术将阳性噬菌体编码的纳米抗体基因克隆至原核表达载体pET25b(+),再转化至大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析重组蛋白表达情况.采用间接ELISA和量子点免疫荧光法验证纳米抗体的结合活性和特异性.结果:通过4轮固相淘选,具有结合活性的噬菌体克隆得到了有效富集,回收率提高了145倍,阳性率从20.83%提高至85.4%.将phage-ELISA鉴定显色值高的两个纳米抗体A25和A26分别进行了重组表达,SDS-PAGE结果显示均为可溶性表达,表达量为60 mg/L.间接ELISA结果表明重组蛋白A25和A26都能够识别c-Myc标签,量子点免疫荧光法验证得到纳米抗体A25能够对SP2/0细胞内的c-Myc蛋白进行检测.结论:成功地筛选出与c-Myc标签结合的纳米抗体噬菌体克隆,构建了两个抗c-Myc标签纳米抗体的原核表达载体并实现了可溶性表达,为检测胞内c-Myc蛋白奠定了基础.
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文献信息
篇名
抗c-Myc标签纳米抗体的筛选与应用
来源期刊
中国生物工程杂志
学科
生物学
关键词
纳米抗体
c-Myc
噬菌体展示
ELISA
量子点
年,卷(期)
2018,(2)
所属期刊栏目
技术与方法
研究方向
页码范围
61-67
页数
7页
分类号
Q819
字数
语种
中文
DOI
10.13523/j.cb.20180209
五维指标
作者信息
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姓名
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李金晶
南昌大学生命科学学院
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许菲
南昌大学生命科学学院
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季艳伟
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舒梅
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纳米抗体
c-Myc
噬菌体展示
ELISA
量子点
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
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期刊影响力
中国生物工程杂志
主办单位:
中国科学院文献情报中心
中国生物技术发展中心
中国生物工程学会
出版周期:
月刊
ISSN:
1671-8135
CN:
11-4816/Q
开本:
大16开
出版地:
北京中关村北四环西路33号
邮发代号:
82-13
创刊时间:
1976
语种:
chi
出版文献量(篇)
4896
总下载数(次)
30
总被引数(次)
45351
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