人脐带间充质干细胞来源外泌体提取方法的比较

• 作者: 周楠 张蘋 李佰一 牛勃 牛玉虎 王振东 王秀伟 王莉 郭莹 高亚杰
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 外泌体 提取方法 培养基 干细胞 Exo Quic-TC试剂盒法 差速超速离心法 Total Exosome Isolation试剂盒法 人脐带间充质干细胞 干细胞治疗 "无细胞"替代疗法 国家自然科学基金
• 年，卷（期）: 2018,（9）
• 所属期刊栏目: 脐带脐血干细胞
• 页码范围: 1382-1388
• 页数: 7页
• 分类号: R394.2
• 字数: 7764字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.0468

摘要

背景:近年来"无细胞"的干细胞治疗方法备受关注,但对于提取高质量外泌体的方法尚无确切定论.目的:采用3种方法提取人脐带间充质干细胞中的外泌体,筛选最佳提取外泌体的方法.方法:分别用Total Exosome Isolation试剂盒、Exo Quick试剂盒及差速超速离心法提取人脐带间充质干细胞来源的外泌体.使用透射电镜观察外泌体形态,BCA法进行蛋白质定量,western blot检测外泌体表面标志物CD9、CD81、CD63的表达.结果与结论:①3种方法均可以从培养基中提取到间充质干细胞来源的外泌体,并且在透射电镜下观察到圆形或椭圆形的膜性小囊泡;②差速超速离心法提取的外泌体中的蛋白浓度和纯度最高,Exo Quick 试剂盒法其次,Total Exosome Isolation试剂盒法得到的蛋白浓度最低,且3者比较差异有显著性意义(P < 0.05);③3种方法提取的外泌体均表达其表面特异性标志物 CD81、CD63和CD9,且在含有相同蛋白浓度的情况下,差速超速离心法提取的外泌体的表面标志物含量最高,Exo Quick 试剂盒法其次,Total Exosome Isolation试剂盒法提取的外泌体表面标志物含量较低;④差速超速离心法和Total Exosome Isolation试剂盒法的操作时间明显多于Exo Quick试剂盒法,差异有显著性意义(P < 0.05);⑤结果表明,尽管差速超速离心法耗时稍长,但是纯度相对较高,满足实验的基本需求,可作为一种合理的分离方法.