LSD1在神经母细胞瘤细胞中促进β-catenin在胞质中堆积

• 作者: 刘铭 张桓瑜 李富江 英庆龙 迟仁杰 陈鑫 鹿洪亭
• 来源期刊: 中华小儿外科杂志
• 关键词: 神经母细胞瘤 β联蛋白 慢病毒
• 年，卷（期）: 2018,（4）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 296-301,289
• 页数: 7页
• 字数: 5934字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-3006.2018.04.012

摘要

目的 本研究旨在证实在神经母细胞瘤细胞(neuroblastoma,NB)中赖氨酸特异性去甲基化转移酶1 (1ysine specific demethylase 1,LSD1)促进β-联蛋白(β-catenin)在胞质中堆积,证实LSD1通过激活Wnt通路,从而引起NB细胞的增殖和转移,并探索其分子机制.方法 将对数生长期的293T细胞,接种在6孔培养板上,感染时细胞密度控制在60％～80％,每孔 2×106个细胞.分别配置溶液A:cDNA 10μl+ cDNA质粒转染培养基90μl;溶液B:空载质粒转染试剂5μl+ cDNA质粒转染培养基95 λl,混合溶液A和溶液B,室温放置30 min形成转染复合物,在含有细胞的无抗生素培养基中加入转染复合物使终体积为2 ml.Quantitative real-time PCR(qPCR)检测LSD1在NB细胞株SH-SY5Y细胞中的表达.LSD1慢病毒过表达载体的构建上调LSD1在NB中的表达.Western blot方法检测在SH-SY5Y细胞株调控LSD1表达后β-catenin的变化.免疫组织化学方法检测在SH-SY5Y细胞株调控LSD1表达后β-catenin的变化.结果 利用Western bolt方法检测人上皮细胞、大鼠神经元细胞、NB细胞中LSD1的表达量,人上皮细胞、大鼠神经元细胞、NB细胞三者的灰度值分别为133.87±10.54、135.00±12.48、192.00± 13.23,三组进行单因素方差分析无明显统计学意义(P＞0.05);建立LSD1稳转细胞株前后,SH-SY5Y细胞表达LSD1量有变化,通过qPCR对SH-SY5Y细胞株中的LSD1基因的相对量进行检测,LSD1表达抑制组的阈值循环数为22.003±0.320,转染空白质粒慢病毒载体的SH-SY5Y细胞组的阈值循环数为17.330±1.166,转染LSD1过表达慢病毒载体组的阈值循环数为13.216±0.137三组进行单因素方差分析,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 在神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y细胞中,β-catenin随着LSD1的表达量的变化而变化,两者在SH-SY5Y细胞中的量呈正相关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	鹿洪亭	青岛大学附属医院小儿外科	56	189	8.0	11.0
2	李富江	青岛大学附属医院小儿外科	17	28	3.0	4.0
3	陈鑫	青岛大学附属医院小儿外科	28	69	5.0	7.0
4	迟仁杰	青岛大学附属医院小儿外科	5	21	3.0	4.0
5	张桓瑜	青岛大学附属医院小儿外科	5	16	2.0	4.0
6	英庆龙	青岛大学附属医院小儿外科	5	27	3.0	5.0
7	刘铭	青岛大学附属医院小儿外科	4	16	2.0	4.0