草地贪夜蛾Sf9细胞中snoRNA Bm-15反义寡核苷酸的定位及其对Bm-15的干涉效率

• 作者: 崔斌 李丹丹 李新梅 杨宗霖 申雅文 路一平 邱妩洁 阚云超
• 来源期刊: 昆虫学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 昆虫 草地贪夜蛾 反义寡核苷酸 snoRNA Bm-15 溶酶体
• 年，卷（期）: 2018,（7）
• 所属期刊栏目: 生理与生化
• 页码范围: 795-800
• 页数: 6页
• 分类号: Q522
• 语种: 中文
• DOI: 10.16380/j.kcxb.2018.07.005

摘要

[目的]利用反义寡核苷酸 (antisense oligonucleotide, ASO) 干涉昆虫核仁小RNA (small nucleolar RNA, snoRNA) Bm-15的表达, 并探索ASO进入细胞后的代谢途径.[方法]利用脂质体携带Cy5标记的、2'-O核糖甲基化修饰和硫代磷酸骨架修饰的Bm-15 ASO转染草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda Sf9细胞, 然后通过Cy5标记与溶酶体及线粒体免疫荧光探针共定位研究Bm-15 ASO在细胞内的转运机制.利用实时荧光定量PCR检测转染Bm-15 ASO的Sf9细胞中Bm-15的表达量, 分析ASO对snoRNA Bm-15的干涉效果.[结果]Bm-15 ASO转染草地贪夜蛾Sf9细胞48 h后, ASO荧光信号充斥整个细胞和位于细胞边缘的比例分别为34％和66％, 说明ASO进入细胞后可能分布在不同的亚细胞器中;进一步对Bm-15 ASO和溶酶体及线粒体进行共定位发现, 位于细胞边缘的ASO大多被运输至溶酶体而不会存在于线粒体等细胞器中.实时荧光定量PCR检测结果表明, 转染Bm-15 ASO的Sf9细胞中Bm-15表达量下降了47％.[结论]即使经过多种化学修饰, ASO仍然逃避不了细胞内源降解机器的识别, 这有效解释了某些情况下利用ASO干涉基因表达时靶标基因干涉效率较低的现象.